肝纤维化发生发展及逆转过程中kupffer细胞表型的研究

发布时间：2016-12-18 04:40

  本文关键词：肝纤维化发生发展及逆转过程中kupffer细胞表型的研究，由笔耕文化传播整理发布。

《中国人民解放军军事医学科学院》 2013年

肝纤维化发生发展及逆转过程中kupffer细胞表型的研究

陈芳艳  

【摘要】：Kupffer细胞（KCs）是位于肝窦状隙内的一类非实质细胞，是机体内单核-巨噬细胞系的成员，属于定居于肝内的巨噬细胞，虽只占肝细胞总数的15%左右，但占单核-巨噬细胞系总数的80％-90％，它们主要位于小叶门静脉区，起重要的防御功能。KCs在生理和病理条件下都具有重要功能，针对KCs的相关实验研究越来越引起人们的重视。KCs不仅能非特异的吞噬和清除血液中的细菌、外源性异物等抗原性物质，而且还具有特异性的免疫应答、抗肿瘤免疫反应、内毒素解毒、抗感染、调节微循环及物质代谢等方面的作用。病理条件下，KCs可被内毒素、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor，TNF)等激活，释放TNF、转化生长因子(transforming growth factor，TGF)、干扰素(IFN)、白介素-1(IL-1)、白介素-6(IL-6)、氧自由基(oxygenfree radical，OFR)、一氧化氮等炎性介质，这些炎性介质均参与了肝损伤的发生与发展。KCs是一类异质性非常强的巨噬细胞，在不同的微环境条件下具有不同的表型，即KCs可分为多种亚型，且功能不同。目前公认的巨噬细胞亚群主要为M1型和M2型两大类。在Th1型细胞因子（例如γ—IFN、TNF-α）作用下，巨噬细胞极化成经典激活的巨噬细胞（CAMφ），即M1型巨噬细胞。而在Th2型细胞因子（例如IL4/IL13）作用下，极化成选择性激活的巨噬细胞（AAMφ），即M2型巨噬细胞。M1型巨噬细胞的主要功能是清除细胞外病原体和促进炎症反应，合成和分泌TNF-α、IL-1、IL-6等促炎细胞因子，通过iNOS将精氨酸代谢成NO来杀灭病原体。而M2型巨噬细胞的主要功能是抑制炎症反应和参与组织修复，合成和分泌抗炎细胞因子IL-10以及通过精氨酸酶-1将精氨酸分解成聚胺，参与合成和稳定细胞外基质，且近年来也有人提出M2型KCs又可分为M2a、M2b及M2c三种亚型。但是在肝纤维化动物模型中，体内KCs亚群的分类还不清楚。 肝纤维化是由持续性损伤-修复反应引起的，导致肝组织内细胞外基质异常沉积，进一步引发肝脏结构和肝功能异常改变的一种病理过程，属于肝硬化的早期阶段，已有大量研究表明肝纤维化在去除损伤因素后是可以逆转的。肝星状细胞作为主要的效应细胞，合成和分泌各种胶原和细胞外基质，一直被认为是肝纤维化发生发展的中心环节。然而，已有研究者发现巨噬细胞作为主要的调节细胞，能同时调节肝星状细胞的功能和基质胶原的降解。在肝纤维化形成过程中，巨噬细胞激活静息状态的肝星状细胞促进肝纤维化的形成，在肝纤维化逆转过程中，促使活化的肝星状细胞凋亡和纤维胶原的降解，促进肝纤维化的逆转。目前已有研究表明在肝纤维化发生发展及逆转中的双向调节作用是由不同的巨噬细胞亚群调控的，但是关于巨噬细胞亚群的分类在动物模型体内还没有系统的研究，而肝脏巨噬细胞（KCs）在肝纤维化中的作用越来越受到关注。我们的研究目的是找到何种表型的KCs分别在肝纤维形成期和逆转期中发挥主要调节作用，为深入研究KCs在肝纤维化疾病中的分子机制奠定基础。肝纤维化的深入研究对预防和缓解肝纤维化病情具有重要的临床意义。 我们首先建立流式细胞术同步分选KCs亚型细胞方法，通过多种细胞表面特异标志物的联合使用区分各亚型细胞，并同时获得这些亚型细胞。流式分选后KCs（F4/80+）得率为（1.26±0.24）×106/小鼠，纯度为（97.6±0.7）%，LSEC(CD146+)污染度为（0.5±0.3）%，T淋巴细胞(CD3+)污染度小于0.5%，细胞纯度、活性及得率均能满足后续体外功能验证研究和进一步的蛋白质组学分析。然后建立CCl_4诱导的小鼠肝纤维化模型，分离纯化急性炎症期、肝纤维化形成期及逆转期的KCs，应用流式细胞术分析各时期KCs表达的表面标志物的差异，应用qRT-PCR检测各时期KCs中炎性细胞因子和纤维化相关的细胞因子的表达差异，以确定各时期KCs的表型。第一次注射CCl_4后，小鼠血清中ALT和AST水平显著升高，尤其是注射后48h时达到最大值，HE染色显示炎性细胞数目显著增加，肝细胞气球样变性，损伤严重，Masson染色显示胶原纤维含量没有增加。实验结果表明第一次注射CCl_4后，小鼠肝脏中发生严重的急性损伤反应，导致大量肝细胞坏死。连续注射CCl_4的过程中，血清中ALT和AST水平逐渐升高但低于急性损伤期，肝脏中胶原纤维含量逐渐增加，肝组织中α-SMA表达量也逐渐增加，并伴随着慢性炎症反应，表明CCl_4诱导小鼠肝纤维化模型构建成功。停止注射CCl_4后，随着自然恢复时间的延长，血清中ALT和AST水平逐渐恢复正常水平，肝组织中α-SMA表达量也显著下降，，接近正常小鼠表达水平，胶原纤维虽然消除缓慢，但在自然恢复6周（R6W）时各项指标均接近正常水平。说明停止注射CCl_4后，肝纤维化小鼠发生自然恢复反应且可以自然恢复到接近正常水平，如果自然恢复时间再延长，可以恢复到正常水平。 肝纤维化模型构建成功后，通过检测肝内KCs的数量变化和细胞因子表达情况确定KCs参与肝纤维化发生发展及逆转过程。肝纤维化发生发展过程中肝内KCs数量显著增加，肝纤维化逆转过程中肝内KCs数量逐渐减少，趋向与正常。KCs通过分泌不同的细胞因子在肝纤维化发生发展及逆转过程中实现双向调节作用。实验结果表明急性炎症期肝内固有KCs（CD45+F4/80hi）主要功能是募集肝外单核细胞进入肝脏，表达炎性细胞因子，促进炎症反应，导致肝损伤，而肝外来源的KCs（CD45+F4/80low）主要功能是促进肝星状细胞活化和表达纤维化相关细胞因子促进肝纤维化发生发展；正常肝脏KCs是M2b型；肝纤维化发生发展及逆转过程中发挥主要作用的KCs表型不同，存在各亚型KCs的表型转换；急性炎症期、肝纤维化形成过程中、肝纤维化逆转过程中发挥主要作用的KCs分别是M1型、M2c型、M2a型。我们首次系统地研究了生理条件下和肝纤维化发生、发展及逆转过程中KCs表型的鉴定，并发现不同表型的KCs之间存在表型的转换，初步明确不同时期KCs的表型，为进一步研究引起发挥不同生物学功能的KCs表型转变的分子机制以及进一步开发抗纤维化治疗新靶点提供研究基础，对肝纤维化的治疗具有重要的临床意义。但是本研究仅描述了在肝纤维化不同时期发挥不同生物学功能的Kupffer细胞具有不同的表型这个现象，没有进一步探讨其机理。

【关键词】：
【学位授予单位】：中国人民解放军军事医学科学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R575.2
【目录】：

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1 赵春洪;张晓岚;;MMPs在肝纤维化形成与逆转过程中的作用[J];临床肝胆病杂志;2009年03期

2 邢雪琨;徐存拴;张富春;;CC趋化因子配体2与肝疾病[J];中国生物化学与分子生物学报;2010年07期

3 范建高,钟岚,王国良,巫协宁,李明升,靖大道,张丕利;枯否氏细胞在大鼠非酒精性脂肪性肝炎发病中的作用[J];中华肝脏病杂志;2001年01期

4 朱跃科,王宝恩,申凤俊,贾继东,马红;实验性肝纤维化基质金属蛋白酶-2基因表达与酶活性的变化[J];中华肝脏病杂志;2005年07期

【共引文献】

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1 戴永美;蔡立勉;林棱;;奥曲肽对大鼠肝星状细胞增殖的抑制作用[J];吉林大学学报(医学版);2009年06期

2 李紫琼;郑勇;;TIMPs和MMPs与肝纤维化研究进展[J];实用肝脏病杂志;2007年05期

3 王旭霞;闻勤生;王景杰;赵曙光;秦明;雷巧玲;;高脂饮食实验性大鼠非酒精性脂肪性肝炎(NASH)进展过程TIMP表达与肝纤维化的关系[J];肝胆外科杂志;2007年05期

4 周俊英;姚树坤;赵彩彦;甄真;;库普弗细胞在大鼠酒精性肝病发病机理中的作用[J];国际消化病杂志;2007年03期

5 Xing-Qing Pan;;The mechanism of the anticancer function of M1 macrophages and their use in the clinic[J];癌症;2012年12期

6 孙之梅;袁瑜;何兴祥;;肠道微生态变化与非酒精性脂肪性肝病研究进展[J];实用肝脏病杂志;2013年03期

7 李跃林;崔俊峰;;枯否氏细胞的结构 功能与非酒精性脂肪性肝炎[J];河北医药;2005年11期

8 顾正义;复方脂肝康颗粒抗大鼠脂肪肝的研究[J];华西药学杂志;2005年02期

9 陈伟;张森林;;CD146的结构和生理功能及其与肿瘤侵袭和转移的关系[J];医学研究生学报;2010年11期

10 王东;李海军;高剑峰;;小鼠CCL2基因毕赤酵母表达载体的构建及鉴定[J];江苏农业科学;2011年04期

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1 熊陶;叶兰;黄能慧;;复方制剂脂肝乐(ZGL)抗大鼠实验性脂肪肝的实验研究[A];第十二次全国中西医结合肝病学术会议论文汇编[C];2003年

2 王晓素;李英;王宪波;刘晓楠;薛冬英;;清肝化痰活血方对非酒精性脂肪性肝炎模型大鼠过氧化物酶体增殖物激活受体α基因表达的影响[A];中国中西医结合第十九次全国消化病学术会议暨国家级中西医结合消化疾病新进展学习班论文汇编[C];2007年

3 杨志云;侯艺鑫;王宪波;;苦参碱对大鼠卵圆细胞介导的肝再生中RBP-J κ、HES1表达的影响[A];中华中医药学会第十五届内科肝胆病学术会议暨国家中医药管理局专科专病协作组（肝病组、传染病组）会议论文汇编[C];2012年

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1 贾爱芹;清肝抑纤饮及其拆方防治大鼠肝纤维化的实验研究[D];山东中医药大学;2010年

2 马晓燕;芪枳合剂治疗脂肪肝的实验研究[D];辽宁中医学院;2002年

3 徐正婕;Kupffer细胞在非酒精性脂肪性肝炎发病中的作用[D];复旦大学;2003年

4 许翠萍;肝大部切除大鼠所致的肠源性内毒素血症对肝损伤及肝再生影响的研究[D];山西医科大学;2005年

5 李翔;糙米型饲粮对鹅鸭肥肝性能影响及朗德鹅肥肝脂肪沉积规律的研究[D];华中农业大学;2005年

6 周俊英;酒精性肝病发病机制及脂肝宁防治ALD作用机理的实验研究[D];河北医科大学;2006年

7 刘祥友;日粮粗纤维水平对6-10周龄肥肝鹅生长性能的影响和朗德鹅与溆浦鹅肥肝脂肪沉积规律的比较研究[D];华中农业大学;2005年

8 严红梅;杞蓟制剂对非酒精性脂肪性肝炎大鼠肝脏脂质代谢及炎性反应的影响[D];湖北中医学院;2007年

9 孙玉岭;乙肝相关性肝病肝脏内干细胞样细胞的特性和定向分化[D];浙江大学;2008年

10 李亚琳;新城疫病毒抑制肝星状细胞的活化及其逆转小鼠肝纤维化的研究[D];第四军医大学;2008年

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1 周云;柔肝冲剂对肝纤维化患者血清MMP-2的影响[D];黑龙江中医药大学;2010年

2 宋瑞华;瘦素、MMP-2和MMP-9在非酒精性脂肪肝病模型大鼠肝脏组织中的表达[D];山西医科大学;2011年

3 张秀田;去氨加压素和垂体后叶素对肝星状细胞增殖、收缩及分泌的影响研究[D];山东大学;2011年

4 孙林林;低分子肝素对大鼠非酒精性脂肪肝炎干预作用基础研究[D];山东大学;2011年

5 曹玉宁;微纤维相关蛋白4在肝纤维化组织中的表达和外周血浓度与肝病理分级的相关性研究[D];泰山医学院;2011年

6 王凤珍;不同治法方药对脂肪肝大鼠kupffer细胞P38MAPK蛋白活性的影响[D];暨南大学;2006年

7 王强;不同治法方药对大鼠脂肪肝kupffer细胞ERK1/2蛋白活性的影响[D];暨南大学;2006年

8 贺丹;吡格列酮防治非酒精性脂肪肝病的实验研究[D];中南大学;2007年

9 乔海;人胎儿胰岛样细胞团源胰腺干细胞分离和鉴定[D];西北农林科技大学;2007年

10 邓丰承;不同治法方药对脂肪肝大鼠肝Kupffer细胞CD14mRNA表达的影响[D];暨南大学;2007年

【二级参考文献】

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1 钟岚,范建高;非酒精性脂肪肝动物模型[J];国外医学(消化系疾病分册);1999年03期

2 赵志海;辛绍杰;赵景民;王松山;周光德;程云;赵平;靳雪源;;实验性肝纤维化逆转过程中基质金属蛋白酶表达的动态研究[J];临床肝胆病杂志;2007年01期

3 徐正婕,范建高,王国良;游离脂肪酸在脂肪性肝炎发病中的作用[J];中华肝脏病杂志;2000年02期

4 中华医学会传染病与,寄生虫病学分会,肝病学分会;病毒性肝炎防治方案[J];中华肝脏病杂志;2000年06期

5 王宪波,刘平,唐志鹏,陆雄,刘成海,胡义扬,徐列明,顾宏图,刘成;大鼠肝纤维化形成中基质金属蛋白酶2、9活性变化的病理意义[J];中华肝脏病杂志;2004年05期

6 朱跃科,王宝恩,申凤俊,贾继东,马红;实验性肝纤维化基质金属蛋白酶-2基因表达与酶活性的变化[J];中华肝脏病杂志;2005年07期

7 朱跃科,阴赪宏,马雪梅,马红,贾继东,王宝恩;实验性肝纤维化模型肝组织MMP-2基因表达与酶活性及中药复方“861”的作用[J];中华实验和临床病毒学杂志;2002年04期

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1 黄瑾;肝星状细胞活化的启动、维持和调控[J];国外医学.消化系疾病分册;2002年04期

2 许君望,龚均,冯新利,罗金燕,董蕾,贾皑,徐贵平;雌激素对肝纤维化大鼠肝星状细胞活化及胶原合成的影响[J];西安交通大学学报(医学版);2003年06期

3 甄真;刘志达;;结缔组织生长因子在肝纤维化形成中作用的研究进展[J];临床肝胆病杂志;2007年04期

4 蒋良君;阳学风;;RNA干扰技术在肝纤维化治疗中的应用[J];中国现代医药杂志;2011年07期

5 罗云,戴立里,沈鼎明;肝星状细胞与肝纤维化的研究进展[J];中华肝脏病杂志;2000年04期

6 余姣;徐可树;;TGF-β家族在肝纤维化中的不同作用及对策[J];世界华人消化杂志;2006年28期

7 花冠春;孙旻;;肝星状细胞在肝纤维化治疗中的研究进展[J];中国现代医生;2009年26期

8 陈萦晅!200001,李继强!200001;以星状细胞为靶向的肝纤维化治疗展望[J];肝脏;2000年03期

9 蒋凤;程明亮;;血小板衍生生长因子及其新成员在肝纤维化发生机制中的作用[J];中华传染病杂志;2007年02期

10 刘萍;陈东风;;肝纤维化的负性调控因素及其作用[J];胃肠病学和肝病学杂志;2009年05期

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1 慕永平;小川智弘;河田则文;;蛋氨酸·胆碱诱导大鼠脂肪性肝纤维化肝细胞凋亡机制研究[A];第二十次全国中西医结合肝病学术会议论文汇编[C];2011年

2 陈俊红;王继;;不同中医治法逆转大鼠肝纤维化的病理观察[A];中华中医药学会中医、中西医结合治疗常见病研讨会论文集[C];2007年

3 李瑞雯;高爱梅;汪晖;;小檗碱对免疫性肝损伤的治疗作用研究[A];全国第十一届生化与分子药理学学术会议论文集[C];2009年

4 程明亮;李宏;姚玉梅;;丹芍化纤胶囊对猪血清免疫性肝纤维化肝中氧化及抗氧化的影响[A];第十三次全国中西医结合肝病学术会议论文汇编[C];2004年

5 叶国荣;舒建昌;;肝星状细胞在肝纤维化中的作用[A];广东省肝脏病学会2007年年会论文集[C];2007年

6 程井军;曾佑祥;孙雅祥;柯冬桂;熊建玲;;电针治疗非酒精性脂肪性肝纤维化患者30例[A];2011中国针灸学会年会论文集（摘要）[C];2011年

7 严福华;;MR弥散加权成像和MR巨噬细胞成像在肝纤维化炎症分级中的应用研究[A];中华医学会第16次全国放射学学术大会论文汇编[C];2009年

8 肖定璋;;肝纤维化细胞模型的建立[A];第五届全国中医药免疫学术研讨会——暨环境·免疫与肿瘤防治综合交叉会议论文汇编[C];2009年

9 缪锡民;;肝纤维化发生机制及治疗对策[A];2005年浙江省感染病、肝病学术会议论文汇编[C];2005年

10 刘克洲;;肝纤维化治疗若干研究进展[A];浙江省中医药学会肝病专业委员会2006年年会暨慢性乙型肝炎诊治研讨会论文集[C];2006年

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1 华中科技大学同济医学院附属同济医院肝病研究所 段瑞娴 刘红艳 程勇卫 高啸 林菊生 唐望先 武汉市第七医院 虞涤霞 华中科技大学同济医学院基础医学院病理学系 吴翠环;[N];保健时报;2009年

2 徐琪忠　王根华;[N];中国医药报;2010年

3 华中科技大学同济医学院附属同济医院肝病研究所 程勇卫 唐望先 段瑞娴 刘红艳 林菊生 杨玉珍 武汉市第七人民医院肝病所 虞涤霞;[N];保健时报;2009年

4 记者 马艳红;[N];中国医药报;2009年

5 黄丁毅;[N];医药经济报;2010年

6 记者 胡德荣;[N];健康报;2011年

7 吴杨 杨苏河;[N];医药经济报;2001年

8 胡德荣;[N];健康报;2004年

9 ;[N];健康报;2005年

10 记者 张旭;[N];中国医药报;2009年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 强晖;肝纤维化相关基因的筛选及其功能初步研究[D];第二军医大学;2003年

2 李志红;酒精性肝纤维化中医证候特点和慢肝消抗酒精性肝纤维化的分子机制[D];北京中医药大学;2004年

3 段志军;肝纤维化形成中MMP-1、TIMP-1表达及益气软肝方保护作用的实验研究[D];大连医科大学;2003年

4 毕红征;RF胶囊抗肝纤维化作用及机理研究[D];成都中医药大学;2005年

5 朱冰;抗纤Ⅰ号方药抗实验性大鼠肝纤维化作用及其分子机制研究[D];河北医科大学;2003年

6 刘丽;RGD依赖的整合素信号通路对肝纤维化大鼠、肝星状细胞胶原代谢的调控作用及丹参单体干预研究[D];河北医科大学;2003年

7 彭彦辉;中药和硒对慢性肝纤维化的预防和治疗作用及其机理研究[D];河北医科大学;2002年

8 喻剑华;虎金颗粒及大黄素抗肝纤维化作用机理研究[D];广州中医药大学;2006年

9 刘东;甘草甜素与苦参碱联合用药对肝纤维化的保护作用研究[D];南方医科大学;2007年

10 黄兆胜;虎金颗粒及其含药血清抗肝纤维化作用机制研究[D];广州中医药大学;2006年

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1 陈芳艳;肝纤维化发生发展及逆转过程中kupffer细胞表型的研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2013年

2 尹旭;海鞘醇类似物LQC-X6抗实验性肝纤维化的研究[D];北京中医药大学;2011年

3 郑力搏;PTEN在CCl_4诱导大鼠肝纤维化和自发逆转肝组织中的动态表达及其与在体肝星状细胞增殖、凋亡的关系[D];河北医科大学;2011年

4 韩芳;PPARγ基因修饰对非酒精性脂肪性肝纤维化的防治机制[D];河北医科大学;2010年

5 施贵静;干扰素-γ对肝星状细胞分泌细胞外基质影响研究[D];中国医科大学;2005年

6 王占魁;丹参单体IH764-3对肝纤维化大鼠胶原降解作用的研究[D];河北医科大学;2002年

7 裴紫燕;大鼠TGFβⅡ型受体胞外区与IFNγ融合蛋白表达及其抗大鼠肝纤维化的实验研究[D];浙江大学;2006年

8 邢陆;加味越鞠丸治疗慢性乙型肝炎肝纤维化的临床研究[D];辽宁中医学院;2002年

9 阎文昭;肝组织与血清转化生长因子β_1表达水平与病毒性肝炎患者肝纤维化的关系[D];河北医科大学;2003年

10 陆亚琴;地龙2号抑制实验性大鼠肝纤维化的基础研究[D];东南大学;2004年

  本文关键词：肝纤维化发生发展及逆转过程中kupffer细胞表型的研究，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：218145