腺相关病毒介导的肝细胞核因子1α过表达改善四氯化碳诱导的小鼠肝纤维化

发布时间：2018-08-16 08:13

【摘要】：目的探讨特异性上调肝细胞中肝细胞核因子1α(HNF1α)表达对四氯化碳(CCl4)诱导的小鼠肝纤维化的影响。方法取18只C57/B6小鼠随机分为正常组、AAV8-TBG-Ctrl组和AAV8-TBG-HNF1α组,每组6只。应用CCl4诱导制备小鼠肝纤维化模型,造模后AAV8-TBG-HNF1α组小鼠通过尾静脉注射带有甲状腺素结合球蛋白(TBG)启动子驱动表达HNF1α的腺相关病毒AAV8-TBG-HNF1α特异性上调肝细胞中HNF1α的表达,AAV8-TBGCtrl组小鼠注射对照病毒AAV8-TBG。采用免疫组织化学法及qPCR检测各组小鼠HNF1α的表达,苏木素-伊红(H-E)染色、天狼猩红染色检测肝组织的病理改变及胶原沉积,免疫组化法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达,并对Ⅰ型胶原(COL1A1)及α-SMA的表达进行软件定量分析;qPCR法检测小鼠肝组织中纤维化相关基因(α-SMA和COL1A1)、上皮指标(E-cadherin和Plakoglobin)及间质指标(Vimentin,Slug和Twist1)的mRNA水平;免疫组化法及TUNEL法检测上调HNF1α对纤维化肝脏中细胞增殖、凋亡的影响。结果与正常组小鼠相比,CCl4造模可促进小鼠肝脏胶原沉积及α-SMA的表达,且在肝纤维化发生过程中HNF1α的表达下降(P0.01);与AAV8-TBG-Ctrl组相比,应用AAV8-TBG-HNF1α特异性上调肝细胞HNF1α的表达可抑制纤维化肝脏中的COL1A1及α-SMA的水平(P0.01)。上调肝细胞HNF1α表达对纤维化肝脏中E-cadherin、Vimentin等上皮间质转换指标的表达无明显影响(P0.05),也不影响肝细胞的增殖与凋亡(P0.05)。结论特异性上调肝细胞HNF1α表达可显著改善CCl4诱导的小鼠肝纤维化。
[Abstract]:Objective to investigate the effect of specific up-regulation of hepatocyte nuclear factor-1 伪 (HNF1 伪) expression on hepatic fibrosis induced by carbon tetrachloride (CCl4) in mice. Methods 18 C57/B6 mice were randomly divided into AAV8-TBG-Ctrl group and AAV8-TBG-HNF1 伪 group with 6 mice in each group. Mouse liver fibrosis model was induced by CCl4. After modeling, the mice in AAV8-TBG-HNF1 伪 group were injected with adeno-associated virus (AAV8-TBG-HNF1 伪) with thyroxine binding globulin (TBG) promoter to specifically up-regulate the expression of HNF1 伪 in hepatocytes. AAV8-TBGCtrl mice were injected with control virus AAV8-TBGCtrl. Immunohistochemical method and qPCR were used to detect the expression of HNF1 伪, hematoxylin and eosin (H-E) staining, sirius red staining to detect the pathological changes and collagen deposition in liver tissue, and 伪 -SMA to detect the expression of 伪 -smooth muscle actin (伪 -SMA) by immunohistochemistry. The expression of type I collagen (COL1A1) and 伪 -SMA were analyzed by software quantitative analysis. The mRNA levels of fibrosis related genes (伪 -SMA and COL1A1), epithelial index (E-cadherin and Plakoglobin) and interstitial index (VimentinSlug and Twist1) were detected by qPCR. The effect of up-regulation of HNF1 伪 on cell proliferation and apoptosis in fibrotic liver was detected by immunohistochemistry and TUNEL method. Results compared with normal mice, CCL _ 4 could promote collagen deposition and 伪 -SMA expression in liver, and decrease the expression of HNF1 伪 during hepatic fibrosis (P0.01), compared with AAV8-TBG-Ctrl group. AAV8-TBG-HNF1 伪 specifically up-regulated the expression of HNF1 伪 in liver cells and inhibited the levels of COL1A1 and 伪 -SMA in fibrotic liver (P0.01). Upregulating the expression of HNF1 伪 had no significant effect on the expression of E-cadherin and Vimentin in the fibrotic liver (P0.05), nor did it affect the proliferation and apoptosis of hepatocytes (P0.05). Conclusion the specific up-regulation of HNF1 伪 expression in hepatocytes can significantly improve the liver fibrosis induced by CCl4 in mice.
【作者单位】： 第二军医大学长征医院消化内科;
【基金】：国家自然科学基金重点项目(81230011)~~
【分类号】：R575.2

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本文编号：2185413