BMP9过表达对甘油三酯代谢的影响及其机制研究

发布时间：2018-10-14 20:35

【摘要】：第一部分BMP9在不同病理模型鼠及人肝脏中的表达差异目的:探讨在NAFLD病人、高脂喂养小鼠及db小鼠肝脏中BMP9mRNA和蛋白的表达情况。方法:普食喂养(ND)和高脂喂养(HFD)23周的C57BL/6J小鼠各10只、正常人和NAFLD病人、同龄db鼠和野生鼠取肝脏提蛋白和RNA,再经Q-PCR和Western blot检测BMP9 mRNA和蛋白的表达差异。结果:BMP9 mRNA和蛋白表达量在HFD小鼠、NAFLD病人和db小鼠肝脏中均显著低于(p0.01)相应对照组。结论:BMP9基因的表达可能与机体脂代谢相关。第二部分BMP9表达上调对饱和脂肪酸诱导的HepG2细胞甘油三酯的影响目的:探讨BMP9表达上调对饱和脂肪酸诱导的HepG2细胞甘油三酯聚集情况的影响方法:在人肝癌细胞HepG2细胞2,利用饱和脂肪酸FFAs(OA:PA=2:1混合)诱导肝细胞脂肪变性细胞模型,根据细胞内脂滴含量的多少及细胞状态确定合适的FFAs的作用浓度。同时,利用BMP9过表达腺病毒(Ad-BMP9)过表达BMP9的表达,通过油红O染色及细胞内甘油三酯含量的测定来检测BMP9基因对FFAs诱导的肝细胞脂质聚集是否有影响。结果:在人HepG2肝癌细胞中,成功诱导肝细胞脂肪变性模型。根据油红O染色结果确定了FFAs的最适作用浓度为0.25m M;根据细胞中荧光表达情况及BMP9 mRNA和蛋白表达情况确定BMP9成功过表达;BMP9 mRNA的表达随着FFAs浓度的增加呈下降趋势,与0m M时比较,0.25m M FFAs时BMP9的表达明显降低(p0.01)。与Ad-GFP组比较,Ad-BMP9组在FFAs诱导的状态下脂滴明显减少(p0.01),TG的含量显著降低(p0.01)。结论:BMP9基因表达上调可以减少甘油三酯的聚集。第三部分BMP9过表达对甘油三酯代谢调节的可能机制目的:探讨BMP9在脂肪酸诱导的肝细胞脂肪变性中对甘油三酯代谢调节的分子机制。方法:在人HepG2肝癌细胞中,过表达BMP9基因,加入0.25m M FFAs诱导肝细胞脂肪变性后,通过Q-PCR和Western blot检测脂肪酸从头合成相关基因(SREBP1C、FAS、SCD-1、ACC-1)的mRNA和蛋白的表达;分析信号通路AMPK的变化情况;利用细胞免疫荧光实验研究BMP9在细胞中表达的部位;利用双荧光素酶报告基因实验检测BMP9基因对SREBP1C基因启动子的调控作用,并寻找可能的结合位点。结果:与Ad-GFP组相比,Ad-BMP9组在FFAs诱导的状态下脂肪酸从头合成相关基因(SREBP1C、FAS、SCD-1、ACC-1)的mRNA表达均显著降低(p0.01);FAS、SCD-1、SREBP1C蛋白表达显著降低(p0.01);ACC和AMPK的蛋白的磷酸化水平均显著增加(p0.01);而AMPK的总蛋白水平明显降低(p0.01)。细胞免疫荧光实验证明BMP9在细胞核和细胞浆中均有表达,但细胞浆中表达较强,核内略弱;双荧光素酶报告基因实验结果表明BMP9基因可显著下调SREBP1C基因启动子的活性(p0.05);将启动子截断后进一步分析发现,BMP9基因调控SREBP1C基因启动子的结合区域可能位于SREBP1C基因启动子-212至-381之间,结合位点为结合元件LXRE1。结论:BMP9过表达可激活AMPK信号通路,通过减少脂肪酸的从头合成从而减少肝细胞内甘油三酯的聚集;且BMP9基因可经结合位点LXRE1抑制SREBP1C基因的启动子活性。
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【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R575

【参考文献】