DRC3f对实验性大鼠非酒精性脂肪肝保护作用的脂肪代谢机制研究

发布时间：2018-10-19 13:57

【摘要】：目的:非酒精性脂肪肝(NAFLD)是一类除外酒精和其他明确损肝因素导致的以肝细胞内脂肪蓄积为主要特点的临床病理综合征。随着人民生活水平的提高,我国NAFLD患病率正在逐年上升。目前研究认为,NAFLD是由多种因素平行作用导致,饮食习惯、遗传因素和环境因素可共同影响脂肪代谢,少数患者可因肝细胞炎症而进展为肝纤维化、肝硬化、肝细胞肝癌。本研究室前期采用飞行质谱技术(MALDI-TOF MS)在慢性乙型肝炎患者血清中检测到一种含有16个氨基酸的差异性多肽片段:脱精氨酸补体C3f(DRC3f),该多肽在轻度和中度的病人血清中表达高于重度病人。进一步研究发现DRC3f具有抑制肝细胞增殖的作用,其对免疫性肝损伤、肝纤维化均有保护作用。本实验室前期关于DRC3f对非酒精性脂肪肝保护性作用的动物实验发现DRC3f可减少高脂饮食联合四氯化碳导致的大鼠肝脏空泡样变,改善血清学指标,但是DRC3f发挥保护作用的具体分子机制尚不完全明确。本研究通过AMPK通路、PPAR/LXR通路和PI3K/Akt通路从脂肪代谢机制的角度来探索DRC3f对非酒精性脂肪肝的保护作用,为非酒精性脂肪肝的治疗提供实验依据。方法:本研究选择前期动物实验中血清学指标和肝组织切片病理学指标均较好的DRC3f 200μg/kg组(DRC3f组)以及正常对照组(正常组)、高脂饮食联合四氯化碳诱导大鼠NAFLD模型组(模型组)、复方甘草酸苷阳性对照组(灌胃给予复方甘草酸苷,复方甘草酸苷组)、降脂通络软胶囊阳性对照组(灌胃给予降脂通络软胶囊,降脂通络软胶囊组)的留存肝组织样本作为研究对象。1应用qRT-PCR方法测定冻存大鼠肝组织中的AMPK信号通路相关指标:adiponectin、LKB1、AMPKα1、AMPKα2、ACC、CPT1、SREBP-1c、PNPLA3、FAS;PPAR和LXR脂代谢相关通路的指标:PPARα、LXRα、PPARγ;炎症、纤维化和细胞增殖相关因子:IL-6、TGF-β1、collagen1、PCNA的基因表达水平。2应用western-blot方法测定正常组、模型组、drc3f组、复方甘草酸苷组、降脂通络软胶囊组肝组织的p-ampkα/ampkα、pi3k、p-akt/akt蛋白相对表达水平。结果:1ampk信号通路的相关基因及蛋白表达水平模型组ampkα1、ampkα2mrna相对表达量与正常组相比均降低(p0.001),drc3f组、复方甘草酸苷组、降脂通络软胶囊组与模型组比,ampkα1、ampkα2mrna相对表达量均升高(p0.01),且drc3f组ampka1和ampkα2mrna表达量高于复方甘草酸苷组和降脂通络软胶囊组(p0.001)。与正常组比,模型组p-ampkα/ampkα蛋白相对表达量降低(p0.01),drc3f组与模型组比p-ampkα/ampkα蛋白相对表达量升高(p0.05)。模型组adiponectin、lkb1mrna相对表达量与正常组相比均降低(p0.05)。与模型组相比,drc3f组adiponectin、lkb1mrna相对表达量均升高(p0.01),且drc3f组adiponectin、lkb1mrna表达量均高于复方甘草酸苷组和降脂通络软胶囊组(p0.05)。模型组cpt1mrna相对表达与正常组相比降低(p0.05),accmrna相对表达升高(p0.001)。与模型组相比,drc3f组、复方甘草酸苷组、降脂通络软胶囊组accmrna相对表达量降低(p0.001),cpt1mrna相对表达量升高(p0.01)。模型组srebp-1c、pnpla3、fasmrna相对表达量与正常组相比均升高(p0.001)。与模型组比,drc3f组、复方甘草酸苷组、降脂通络软胶囊组srebp-1c、pnpla3、fasmrna相对表达量均降低(p0.01),但是drc3f组srebp-1cmrna表达水平高于降脂通络软胶囊组(p0.001),而pnpla3、fasmrna与降脂通络软胶囊组和复方甘草酸苷组之间无显著性差别。2pparα、lxrα、pparγ的基因表达水平各组之间pparα与lxrαmrna相对表达量均无统计学差异。模型组与正常组比,pparγmrna相对表达量升高(p0.001);降脂通络软胶囊组与模型组比pparγmrna相对表达量降低(p0.05),但是drc3f组与模型组相比无统计学差异(p=0.118)。3胰岛素相关PI3K、p-Akt/Akt的蛋白表达水平Western blot结果显示,正常组、模型组、DRC3f组、复方甘草酸苷组、降脂通络软胶囊组PI3K和p-Akt/Akt的蛋白相对表达均无统计学差异。4炎症、纤维化和细胞增殖相关因子IL-6、TGF-β1、collagen1、PCNA的表达水平模型组IL-6、TGF-β1、collagen1 mRNA相对表达量与正常组相比均升高(P0.001)。与模型组相比,DRC3f组、复方甘草酸苷组、降脂通络软胶囊组IL-6、TGF-β1 mRNA相对表达量均降低(P0.05);DRC3f组、复方甘草酸苷组、降脂通络软胶囊组collagen1 mRNA相对表达水平降低(P0.05),且DRC3f组collagen1 mRNA相对表达量低于复方甘草酸苷组和降脂通络软胶囊组(P0.01)。各组之间PCNA mRNA相对表达量无统计学差异。结论:1 DRC3f对高脂饮食联合四氯化碳诱导的非酒精性脂肪肝的保护作用可能是通过上调adiponectin、LKB1激活AMPK,从而调节ACC、CPT1促进脂肪酸氧化以及通过激活AMPK抑制SREBP-1c、PNPLA3、FAS使脂肪合成减少来发挥,DRC3f可在一定程度上减轻由高脂饮食联合四氯化碳诱导的大鼠肝脏炎症反应和纤维化。2 DRC3f的治疗作用可能与PPAR/LXR通路无关。DRC3f的治疗作用可能与PI3K/Akt通路无关。
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【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R575.5

【参考文献】