PAR-2激动剂对小鼠胃肠动力的影响及其作用机制研究

发布时间：2018-11-21 14:56

【摘要】：目的:蛋白酶激活受体-2(Proteinase-actived receptors-2，PAR-2)属于七次跨膜的G蛋白偶联受体，胰蛋白酶、肥大细胞释放的类胰蛋白酶以及人工合成的多肽SLIGRL-NH2、SLIGKV-NH2都可激活该受体。PAR-2受体在胃肠道广泛表达，除与胃肠道上皮细胞的离子转运、内脏敏感性等功能有关外，还与胃肠动力的调控密切相关，但具体的调控机制尚未明确。本实验研究PAR-2mRNA及蛋白在小鼠胃肠道的表达情况及PAR-2激动剂对小鼠胃肠动力的影响，并着重探讨PAR-2激活后对小鼠离体回肠纵行肌收缩振幅的影响及其相关作用机制。方法: 1分别通过RT-PCR及免疫组织化学法研究小鼠胃肠道（胃、十二指肠、空肠及回肠）中PAR-2mRNA及蛋白的表达情况； 2活体实验:将120只雌性BABL/c小鼠随机进行分组，共分为6组，每组20只，分别为空白对照组、抑氨肽酶素A对照组、LRGILS-NH2（5μmol/kg）+抑氨肽酶素A组、SLIGRL-NH2（1μmol/kg）+抑氨肽酶素A组，SLIGRL-NH2（2.5μmol/kg）+抑氨肽酶素A组、SLIGRL-NH2（5μmol/kg）+抑氨肽酶素A组，测定各组药物对小鼠胃内色素排空率和小肠推进率的影响； 3离体实验:观察胰蛋白酶、SLIGRL-NH2、LRGILS-NH2及各种预处理药品(阿托品、TTX、辣椒素、NK1拮抗剂及NK2受体拮抗剂)作用后对小鼠回肠纵行肌收缩振幅的影响。结果: 1PAR-2mRNA在小鼠消化道（胃、十二指肠、空肠及回肠）均有广泛表达；PAR-2在小鼠消化道（胃、十二指肠、空肠及回肠）的粘膜层、粘膜下层、肌层均呈免疫阳性反应； 2在体实验:PAR-2激动剂对小鼠胃内色素排空率和小肠推进率的影响 2.1抑氨肽酶素A组与空白对照组相比，对小鼠胃内色素排空率和小肠推进率影响均无统计学意义（p0.05）。 2.2与空白对照组相比，SLIGRL-NH2在2.5μmol/kg及5μmol/kg浓度时均能显著提高胃内色素排空率和小肠推进率（p0.001）。 2.3与空白对照组相比，LRGILS-NH2即使在5μmol/kg也不能明显影响小肠推进比和胃内色素排空率（p0.05）； 3离体实验:PAR-2激动剂及相关工具药对小鼠回肠纵行肌收缩振幅的影响。 3.1PAR-2激动剂（胰蛋白酶、SLIGRL-NH2）都可以增强小鼠离体回肠纵行肌的自主收缩幅度,并呈现浓度依赖效应；PAR-2反肽LRGILS-NH2（10-9-10-5M）对小鼠离体回肠纵行肌的自主收缩幅度无明显影响。 3.2阿托品对PAR-2引起的回肠纵行肌收缩的增强效应无明显影响。 3.3TTX对PAR-2引起的回肠纵行肌收缩的增强效应的影响:TTX（2uM）预处理30min+胰蛋白酶组与胰蛋白酶组相比，明显降低了小鼠回肠纵行肌收缩幅度振幅（p0.05）；与此类似的是TTX（2uM）预处理30min+SLRGIL-NH2组与SLRGIL-NH2组相比，也明显降低了小鼠回肠纵行肌收缩振幅（p0.05）。 3.4辣椒素对PAR-2引起的回肠纵行肌收缩的增强效应的影响：辣椒素（10-4M）预处理30min+胰蛋白酶组与胰蛋白酶组相比，明显降低了小鼠回肠纵行肌收缩振幅（p0.05）；辣椒素（10-4M）预处理30min+SLRGIL-NH2组与SLRGIL-NH2组相比，也明显降低了小鼠回肠纵行肌收缩振幅（p0.05）。 3.5NK1及NK2受体对PAR-2引起的回肠纵行肌收缩的增强效应的影响:sc-203095（1uM）预处理30min+胰蛋白酶组与胰蛋白酶组相比，明显降低了小鼠回肠纵行肌收缩振幅（p0.05）；MEN10376（1uM）预处理30min+胰蛋白酶组与胰蛋白酶组相比，明显降低了小鼠回肠纵行肌振幅（p0.05）；sc-203095（1uM）、MEN10376（1uM）预处理30min+胰蛋白酶组与胰蛋白酶组相比，明显降低了小鼠回肠纵行肌振幅（p0.05）；sc-203095（1uM）预处理30min+SLRGIL-NH2组与SLRGIL-NH2组相比,明显降低了小鼠回肠纵行肌收缩振幅（p0.05）；MEN10376组（1uM）预处理30min+SLRGIL-NH2组与SLRGIL-NH2组相比，，明显降低了小鼠回肠纵行肌收缩振幅（p0.05）；sc-203095（1uM）、MEN10376（1uM）预处理30min+SLRGIL-NH2组与SLRGIL-NH2组相比，明显降低了小鼠回肠纵行肌收缩振幅（p0.001）。结论: 1PAR-2在小鼠的胃肠道（胃、十二指肠、空肠、回肠）中呈广泛表达状态，与小鼠胃肠动力的调控密切相关。 2在活体实验中PAR-2激活后能够明显的促进小鼠胃肠道食物的通过。 3在离体实验中PAR-2激动剂能明显增强小鼠离体回肠纵行肌的收缩振幅，并且这种增强作用与神经有关，主要涉及TRPV1敏感的感觉神经通路及NK1和NK2受体。
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【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R57

【引证文献】