沙利度胺对大鼠TNBS结肠炎肠壁纤维化形成的影响及其机制研究

发布时间：2019-05-08 03:40

【摘要】：背景炎症性肠病（inflammatory bowel disease，IBD）包括溃疡性结肠炎（ulcerative colitis，UC）和克罗恩病（Crohn disease，CD），其病因目前认为是由多种因素(主要包括环境、遗传、感染和免疫因素)相互作用引起的慢性炎症反应[1]所致。这种慢性炎症反复发作过程导致黏膜不断被破坏和修复，这一过程引起肠道间质的成纤维细胞与肌成纤维细胞活化，进而产生大量的细胞外基质（Extracellular matrix，ECM），同时基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinases，MMPs）/基质金属蛋白酶组织抑制剂（tissue inhibitor of metalloproteinase，TIMPs）的动态平衡被打破使ECM降解失衡，两方面因素导致ECM的过度沉积，最终发生肠壁纤维化[2]。研究认为TGF-β信号通路是IBD纤维化过程中重要机制。现今IBD的主要治疗药物有氨基水杨酸制剂、糖皮质激素和免疫抑制剂，这些药物主要是在炎症活动期起到抗炎作用，但长期慢性炎症导致的肠壁纤维化却不可避免[3]。因此，对IBD早期防治的研究应着力于肠壁纤维化的形成机制，这将为IBD的治疗和预防提供新的靶点。沙利度胺是德国制药商格兰泰公司20世纪50年代推出的一种镇静剂，为谷氨酸衍生物，具有免疫抑制、免疫调节作用。动物实验中看到沙利度胺在多种器官纤维化如腹膜纤维化[4]、肺纤维化[5-8]、肝纤维化[9-12]及心肌梗死后的结构重塑[13]中起着抑制纤维化的作用，其作用机制主要是通过抑制转化生长因子-β1（transforming growth factor-β，TGF-β1）的分泌，使TGF-β1表达水平下调，其分泌水平的下调引起细胞外基质沉积减少导致胶原合成减少，同时TGF-β1水平下调破坏了MMPs/TIMPs之间的平衡来抑制ECM沉积从而抑制纤维化形成。因此我们推测，在炎症性肠病肠壁纤维化中，沙利度胺可能通过抑制TGF-β1的胶原合成及促进基质沉积的作用来抑制肠壁纤维化的形成，这为IBD的临床治疗提供新的思路。目的探讨沙利度胺能否抑制三硝基苯甲酸（trinitrotoluene，TNBS）结肠炎大鼠肠壁纤维化的发生及形成及其主要机制。方法将60只SD大鼠随机分4组，每组15只：正常组、模型组、治疗组及对照组。正常组给予生理盐水灌肠后给予正常饮食饮水，不做特殊处理；模型组给予TNBS/乙醇混合液（混合液按100mg/kg计算的TNBS加上等体积的无水乙醇）灌肠[14]后给予正常饮食饮水，不做特殊处理；治疗组给予TNBS灌肠后，将沙利度胺药片碾碎溶于橄榄油（40mg/ml），每日早8点给予大鼠沙利度胺200mg/kg/d灌胃[15]；对照组给予TNBS灌肠后第2天开始每日给予同治疗组相同剂量的橄榄油灌胃。每日观察并记录所有大鼠的精神、活动及毛发状态，大便性状及便血情况，体重下降情况，并行疾病活动指数评分（Disease activity index，DAI），28天后处死所有大鼠取各组结肠组织，行大体形态损伤指数（colon macroscopic damageindex， CMDI）评分，病理切片行HE染色及Masson染色观察并评估结肠慢性炎症及纤维化程度，取各组结肠组织匀浆行Elisa及western blot检测各组结肠组织TGF-β1、I型及III型胶原、MMP-2、MMP-9及TIMP-1蛋白的表达水平。结果经过造模及药物干预，与正常组大鼠相比，模型组大鼠精神萎靡，，出现稀糊状及黏液脓血便，体重明显下降，DAI评分明显升高，而治疗组上述情况较模型组好转，DAI评分较模型组下降，差异有统计学意义，对照组情况与模型组无显著差异。与正常组相比，模型组CMDI评分明显升高，病理切片HE染色可见多量慢性炎症细胞浸润，Masson染色可见大量胶原沉积，而治疗组上述指标改善，差异有统计学意义。结肠组织均浆行Elisa检测及western检测可见，与正常组相比，模型组TIMP-1、TGF-β1、I型及III型胶原表达水平显著升高（P0.05），MMP-2及MMP-9蛋白的表达水平下降（P0.05），而治疗组较模型组TIMP-1、TGF-β1、I型及III型胶原表达水平下降（P0.05），MMP-2及MMP-9蛋白的表达水平升高（P0.05），差异有统计学意义，而对照组与模型组无明显差异。结论沙利度胺能够抑制大鼠TNBS结肠炎肠壁纤维化，其机制可能是通过抑制肠壁TGF-β1的表达,减少间质胶原的合成并调节MMPs/TIMPs平衡而实现的。
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【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R574

【参考文献】