慢病毒载体介导Runx3基因过表达对慢性乙型肝炎患者外周血Th细胞分化的影响

发布时间：2017-03-04 11:50

  本文关键词：慢病毒载体介导Runx3基因过表达对慢性乙型肝炎患者外周血Th细胞分化的影响，由笔耕文化传播整理发布。

《苏州大学》 2013年

慢病毒载体介导Runx3基因过表达对慢性乙型肝炎患者外周血Th细胞分化的影响

张毅  

【摘要】：第一部分慢性乙型肝炎患者外周血CD4~+T细胞Runx3的表达 目的探讨慢性乙型肝炎患者外周血CD4~+T细胞Runx3mRNA的表达及意义。 方法选取37例慢性乙型肝炎患者和19例健康对照者，应用密度梯度离心法分离外周血CD4~+T细胞，应用实时定量PCR检测CD4~+T细胞Runx3mRNA的表达水平。 结果慢性乙型肝炎组Runx3mRNA的表达水平（0.48±0.09）较健康对照组（0.79±0.17）明显降低（P0.01）。 结论Runx3基因可能参与了慢性乙型肝炎的发病过程。 第二部分人Runx3基因重组慢病毒载体的构建与鉴定 目的构建人Runx3基因重组慢病毒载体。 方法PCR扩增人Runx3基因，应用In-Fusion技术将Runx3基因PCR扩增产物交换进入线性化慢病毒载体pGC-FU以构建重组慢病毒质粒pGC-FU-Runx3，转化大肠杆菌DH5α感受态细胞。对长出的阳性克隆进行PCR鉴定，并进行测序和比对分析。将构建成功的重组慢病毒质粒pGC-FU-Runx3与包装质粒pHelper1.0、包膜质粒pHelper2.0共转染293T细胞进行病毒包装。荧光显微镜下观察重组慢病毒质粒pGC-FU-Runx3转染293T细胞后细胞内绿色荧光表达情况。Western blot检测Runx3与EGFP融合蛋白表达情况。实时定量PCR测定病毒滴度。 结果重组慢病毒质粒pGC-FU-Runx3经测序和比对分析证实目的基因序列正确。三质粒共转染293T细胞后荧光显微镜下观察细胞内可见明显的绿色荧光。Western blot证实Runx3与EGFP融合蛋白在293T细胞内稳定表达。浓缩病毒后测定滴度为2.0×10~8TU/ml。 结论成功构建携带人Runx3基因的重组慢病毒载体pGC-FU-Runx3。 第三部分Runx3基因过表达对慢性乙型肝炎患者外周血Th细胞分化的影响 目的探讨Runx3基因过表达对慢性乙型肝炎患者外周血Th细胞分化的影响。 方法重组慢病毒载体pGC-FU-Runx3与阴性对照慢病毒载体pGC-FU分别转染29例慢性乙型肝炎患者外周血CD4~+T细胞，，收集培养3d、5d和7d的细胞培养液上清，应用ELISA检测Th1型细胞因子IFN-γ、IL-2和Th2型细胞因子IL-4、IL-10的表达水平。收集培养5d的CD4~+T细胞，应用实时定量PCR检测转录因子T-bet、GATA3mRNA的表达水平。 结果1.与pGC-FU转染组比较，pGC-FU-Runx3转染组Th1型细胞因子IFN-γ的表达水平在3d（P0.05）、5d（P0.01）和7d（P0.01）时均明显升高；IL-2的表达水平在3d时无显著性差异（P0.05），但在5d（P0.05）和7d（P0.01）时均明显升高。2.与pGC-FU转染组比较，pGC-FU-Runx3转染组Th2型细胞因子IL-4的表达水平在3d时无显著性差异（P0.05），但在5d（P0.01）和7d（P0.05）时均明显降低；IL-10的表达水平在3d时无显著性差异（P0.05），但在5d和7d时均明显降低（P均0.05）。3.与pGC-FU转染组比较，pGC-FU-Runx3转染组IFN-γ/IL-4比值在3d、5d和7d时均明显增大（P均0.01）。4.与pGC-FU转染组比较，pGC-FU-Runx3转染组T-bet、GATA3mRNA的表达水平无显著性差异（P0.05），但pGC-FU-Runx3转染组T-bet/GATA3比值较pGC-FU转染组明显增大（P0.01）。 结论Runx3基因过表达可促进慢性乙型肝炎患者Th1型细胞因子的分泌，抑制Th2型细胞因子的分泌，促使慢性乙型肝炎患者外周血Th细胞向Th1细胞分化，使其Th1/Th2失平衡得到改善。

【关键词】：
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R512.62
【目录】：

下载全文 更多同类文献

CAJ全文下载

(如何获取全文？ 欢迎：购买知网充值卡、在线充值、在线咨询)

CAJViewer阅读器支持CAJ、PDF文件格式

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 游晶;庄林;马永良;唐宝璋;;慢性乙型肝炎的Th细胞亚群及相关细胞因子网络失衡[J];世界华人消化杂志;2007年08期

2 姜荣龙 ,冯筱榕 ,郭亚兵 ,卢桥生 ,侯金林 ,骆抗先 ,富宁;T helper cells in patients with chronic hepatitis B virus infection[J];Chinese Medical Journal;2002年03期

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 范公忍;赵满仓;魏文清;李娟;贾志凌;王北宁;;乙型肝炎病毒感染者外周血T淋巴细胞亚群表达与其血清HBV-DNA水平的相关性分析[J];标记免疫分析与临床;2011年05期

2 王福生;张纪元;;HBV感染免疫应答和免疫治疗新进展[J];传染病信息;2011年04期

3 段国荣,周永兴,聂青和,贾战生,冯志华,谢玉梅;TH1/TH2在慢性丙型肝炎发病机制中的作用[J];第四军医大学学报;2001年14期

4 文维群,章廉,胡章勇,张明霞,骆抗先;HBV感染者外周血单个核细胞白细胞介素18mKNA的表达[J];第一军医大学学报;2001年06期

5 姚上志;苏婷婷;周红燕;;血浆置换治疗重型肝炎患者对多种细胞因子及T淋巴细胞亚群的影响[J];实用肝脏病杂志;2010年06期

6 郭丹丹;张永宏;马丽娜;柳雅立;鲁俊锋;金怡;何智敏;画伟;郑燕红;陈新月;;慢性丙型肝炎患者抗病毒疗效与血清Th1/Th2类细胞因子水平的相关分析[J];传染病信息;2013年02期

7 龚钰清;龚钰清;盛国光;;拉米夫定联合苦参素治疗慢性乙型肝炎患者外周血T细胞亚群和细胞因子的变化[J];实用肝脏病杂志;2013年03期

8 杨智;陈洪涛;吴诗品;;肝细胞癌患者PBMCs中T-bet、GATA3和Foxp3 mRNA水平及其意义[J];实用肝脏病杂志;2013年03期

9 李国勤;卢立志;王德前;沈军达;陶争荣;原爱平;;感染RA和DVHV雏鸭免疫功能动态变化研究[J];黑龙江畜牧兽医;2008年06期

10 王玉惠;江叙;孙志克;;乙肝病毒感染孕妇及其出生婴儿的防治[J];吉林医学;2006年05期

中国重要会议论文全文数据库 前1条

1 娄小娥;孙箴;许晓燕;朱海宏;周林福;陈智;;双环醇对小鼠T淋巴细胞亚群和细胞因子水平的影响[A];2007年浙江省医学病毒学、医学微生物与免疫学学术年会论文汇编[C];2007年

中国博士学位论文全文数据库 前5条

1 李玲;激活诱导细胞死亡在乙型肝炎发病机制中的意义[D];第三军医大学;2001年

2 黄振宇;HBV感染不同状态下树突状细胞的生物学研究[D];中南大学;2007年

3 谢勇;桔梗中皂苷的免疫佐剂活性研究[D];浙江大学;2008年

4 马萍;替比夫定治疗对HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者免疫功能的影响[D];天津医科大学;2012年

5 王亚东;NK细胞介导的抗HBV感染免疫作用及其机制研究[D];河北医科大学;2013年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 何显;脂联素及其受体在各型慢性乙型肝炎患者肝组织的表达和意义[D];河北医科大学;2011年

2 许春梅;T细胞亚群、IL-32、IL-6与乙型肝炎的相关性研究[D];石河子大学;2010年

3 牛丹;肝衰竭预后的临床研究[D];苏州大学;2011年

4 段国荣;慢性乙型肝炎、慢性丙型肝炎患者免疫功能及其差异的探讨[D];第四军医大学;2001年

5 文维群;IL-18在慢性乙型肝炎患者中的表达及其临床意义[D];第一军医大学;2001年

6 何登明;慢性HBV感染者辅助性T细胞功能分析及拉米夫定治疗对其影响[D];第三军医大学;2003年

7 黄景宁;HBV感染者血清IL-2、IL-4水平与HBV DNA关系的研究[D];广西医科大学;2004年

8 邱庆明;Th1/Th2细胞在慢性乙型肝炎急性发作的免疫应答研究[D];广西医科大学;2004年

9 陈皋;乙型肝炎病毒所致肝硬化患者血清内毒素、IL-4、IL-18水平变化的研究[D];昆明医学院;2004年

10 王艳;慢性HBV感染者载脂蛋白E基因多态性分析[D];山西医科大学;2004年

【二级参考文献】

中国期刊全文数据库 前9条

1 孙晓玲;原发性肝癌患者手术前后血清NO/NOS、TNF检测的临床意义[J];放射免疫学杂志;2005年04期

2 邢同京,章廉,骆抗先,侯金林,张明霞,冯筱榕;Th1/Th2类细胞因子对慢性乙型肝炎患者淋巴细胞凋亡的影响[J];解放军医学杂志;2000年01期

3 陈群,王胜春,汤斌;慢性肝病、肝癌患者IL-6、IL-8和TNF-α活性测定及意义[J];临床肝胆病杂志;1998年03期

4 曹驰,李彩霞;原发性肝癌的免疫状态与预后的相关性分析[J];肿瘤防治杂志;2004年02期

5 孔丽,姚树坤,刘金星,王娜;原发性肝癌患者细胞免疫功能变化及其与转归的关系[J];中华肝脏病杂志;2005年03期

6 许佳平,白宪光;肝炎、肝硬化、肝癌患者外周血TGF-β_1的检测[J];中华实验和临床病毒学杂志;2002年03期

7 姜荣龙 ,冯筱榕 ,郭亚兵 ,卢桥生 ,侯金林 ,骆抗先 ,富宁;T helper cells in patients with chronic hepatitis B virus infection[J];Chinese Medical Journal;2002年03期

8 曹志新,陈孝平,吴在德;肝癌组织辅助性T细胞-2细胞因子强势分泌研究[J];中华实验外科杂志;2003年10期

9 Nusret Akpolat;Seyfettin Yahsi;Ahmet Godekmerdan;Kutbettin Demirbag;Mehmet Yalniz;;Relationship between serum cytokine levels and histopathological changes of liver in patients with hepatitis B[J];World Journal of Gastroenterology;2005年21期

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 向星宇;马文丽;宋艳斌;姜茂竹;王妮莎;郑文岭;;Hsa-mir-196b慢病毒表达载体的构建及鉴定[J];热带医学杂志;2010年05期

2 曾四平;章小平;肖亚军;;Has-miR-129慢病毒表达载体的构建[J];临床合理用药杂志;2010年09期

3 郭建新;李力;白垚;程小星;邓少丽;郑秀惠;;慢病毒携带shRNA对宫颈癌细胞中HPV16型E6表达的抑制作用[J];第三军医大学学报;2006年11期

4 韩苏夏;赵晶;马瑾璐;黄辰;吕毅;欧玮;贾茜;;慢病毒介导的融合基因SP-TAT-Apoptin对HepG2细胞的作用[J];细胞与分子免疫学杂志;2010年04期

5 张彤;方天翎;李华;聂常富;蔡常洁;许赤;汪根树;李玺;易慧敏;姜楠;陈规划;;HLA-E基因慢病毒载体构建及其在肝癌HepG2细胞中的表达[J];中国实用外科杂志;2008年03期

6 杜丽丽;林戈;卢光琇;;4种全能性基因转入人胚胎成纤维细胞诱导多能性干细胞系的建立及其鉴定(英文)[J];中南大学学报(医学版);2009年12期

7 王治东;葛常辉;许望翔;詹轶群;李长燕;曹萌萌;董波;杨晓明;;慢病毒颗粒包装、浓缩及对脐带血CD34~+细胞感染[J];军事医学科学院院刊;2009年06期

8 顾卫娟;毕焕京;李建民;;HRB2基因对细胞增值影响的研究[J];现代生物医学进展;2010年09期

9 袁存存;蔡红兵;黄宇琦;叶艳芬;赵曼丽;吕晓明;李欣;;慢病毒介导的ebv-miR-BART7稳定过表达鼻咽癌细胞株CNE1的建立[J];南方医科大学学报;2011年03期

10 梁旭竞;陈小佳;陈友鹏;杨冬华;;慢病毒介导hTERT基因对肝细胞生物学特性的影响[J];细胞与分子免疫学杂志;2010年08期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 苗凯;郭敏;安磊;许晓玲;武韩;王栋;吴中红;田见晖;;低滴度慢病毒生产转基因胚胎和小鼠的新方法[A];中国畜牧兽医学会动物繁殖学分会第十五届学术研讨会论文集（上册）[C];2010年

2 王旭东;仲人前;;慢病毒载体介导microRNA-21抑制体的构建与转染[A];2010’全国肿瘤分子标志及应用学术研讨会暨第五届中国中青年肿瘤专家论坛论文汇编[C];2010年

3 宋玉文;韩文霞;高聆;于春晓;;慢病毒介导绿色荧光蛋白感染大鼠肾小球系膜细胞实验研究[A];中华医学会第十次全国内分泌学学术会议论文汇编[C];2011年

4 魏梦绮;;TFR和VEGF基因双顺反动子慢病毒感染骨髓基质细胞的研究[A];中华医学会第十八次全国放射学学术会议论文汇编[C];2011年

5 怀磊;王翠翠;张翠萍;李其辉;唐克晶;邢海燕;饶青;王敏;王建祥;;慢病毒介导的RNA干扰抑制MEIS1的表达对NB4细胞增殖、凋亡、分化影响的研究[A];第13届全国实验血液学会议论文摘要[C];2011年

6 刘政海;王晓晟;罗学港;万炜;;视觉剥夺对视神经横断后无长突细胞TH表达的影响[A];中国解剖学会2011年年会论文文摘汇编[C];2011年

7 陈帅;李浩博;李牧;李双;赵培林;;基于树突状细胞的肿瘤疫苗构建及其抗肿瘤效应研究[A];中国解剖学会2011年年会论文文摘汇编[C];2011年

8 张红霞;刘志;文钊东;吴王锁;;Th(Ⅳ)在高岭土上的吸附动力学和热力学[A];中国化学会第28届学术年会第8分会场摘要集[C];2012年

9 倪菊华;张悫;;ELAN 9000 ICP-MS测量U、Th及其衰变子核的初步探讨[A];第十三届全国稀土化学分析学术研讨会论文集[C];2011年

10 金文杰;陈平;邹容;毛堔璐;季璐璐;孙杰;钱燕宁;;麻醉和镇痛药及人工胶体对Th细胞分化影响的研究工作汇报[A];全国第一次麻醉药理学术会议暨中国药理学会麻醉药理专业委员会筹备会论文汇编[C];2010年

中国重要报纸全文数据库 前5条

1 许增泉;[N];中国医药报;2011年

2 钟地;[N];地质勘查导报;2010年

3 闵杰;[N];中国服饰报;2010年

4 广知;[N];医药经济报;2004年

5 余海若;[N];大众科技报;2004年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 陈春经;慢病毒载体介导胰岛素样生长因子-1基因修饰肌源性干细胞移植治疗雌性压力性尿失禁大鼠的实验研究[D];福建医科大学;2012年

2 胡晓;雌激素受体α对小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎的抑制作用[D];重庆医科大学;2011年

3 陈睿婷;重组白介素12慢病毒的构建及感染皮瓣主要细胞的实验研究[D];北京协和医学院;2010年

4 周建松;HPV16E6/E7共同启动子shRNA慢病毒的构建及其对宫颈癌细胞株抑制作用的体内外研究[D];浙江大学;2012年

5 邓海军;MicroRNA-338-3p前体及其抑制剂的慢病毒表达载体的构建和初步功能性分析[D];南方医科大学;2013年

6 叶俊梅;组蛋白去乙酰化酶，caspases，多聚嘧啶通道结合蛋白和RUNX3对大肠肿瘤的调节作用[D];武汉大学;2011年

7 朱煊;重组慢病毒CXCR7-shRNA对人膀胱癌细胞生物学行为影响的研究[D];中南大学;2012年

8 周海涛;慢病毒介导的Nanog基因对周围神经损伤性神经病理性疼痛模型脊髓突触重塑的影响[D];福建医科大学;2012年

9 赖颖晖;慢病毒介导α-反义寡核苷酸对β-地中海贫血小鼠的作用[D];广西医科大学;2010年

10 刘涛;慢病毒介导的Foxa2和Hnf4a组成性表达对胚胎干细胞向肝细胞分化的影响[D];第三军医大学;2009年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 张毅;慢病毒载体介导Runx3基因过表达对慢性乙型肝炎患者外周血Th细胞分化的影响[D];苏州大学;2013年

2 陈维;慢病毒介导转基因小鼠胚胎的初步研究[D];华中农业大学;2011年

3 孙克宁;利用慢病毒载体制备转基因小鼠和牛胚胎的研究[D];河南农业大学;2011年

4 张旭;miR-122对HBV感染的肝癌细胞增殖和凋亡的影响及其机制研究[D];第四军医大学;2012年

5 毛亚江;肿瘤转移抑制蛋白Mtss1慢病毒干扰载体的构建和鉴定[D];湖南师范大学;2010年

6 陈尊洲;TH公司港口综合配套服务的业务战略研究[D];兰州大学;2010年

7 张文娟;慢病毒介导猪HOXB4基因在骨髓间充质干细胞中表达的研究[D];吉林大学;2013年

8 杨子谦;U(Ⅵ)和Th(Ⅳ)在金川膨润土上的吸附[D];兰州大学;2010年

9 黄敏;重组慢病毒载体介导艾滋病毒Rev蛋白调控卡波济肉瘤相关疱疹病毒裂解性周期复制的研究[D];南京医科大学;2010年

10 陈丽妹;Grb2抑制对肠癌细胞HT29肿瘤相关信号转导的影响[D];福建医科大学;2012年

  本文关键词：慢病毒载体介导Runx3基因过表达对慢性乙型肝炎患者外周血Th细胞分化的影响，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：247622