乙型肝炎病毒DNA X蛋白突变预测乙肝相关性肝细胞肝癌患者术后生存率的研究

发布时间：2017-03-07 05:58

  本文关键词：乙型肝炎病毒DNA X蛋白突变预测乙肝相关性肝细胞肝癌患者术后生存率的研究，由笔耕文化传播整理发布。

《河北医科大学》 2015年

乙型肝炎病毒DNA X蛋白突变预测乙肝相关性肝细胞肝癌患者术后生存率的研究

王文帅  

【摘要】：目的:构成乙型肝炎病毒基因组的4个读码框是重叠开放的,各自编码一种蛋白。其中X基因重叠包绕启动子与增强子2,前核心区和核心区域的转录作用受以上两个因子控制。由于乙型肝炎病毒聚合酶的校对缺陷,导致乙型肝炎病毒DNA容易发生突变。HBV基因型和病毒DNA载量均和乙肝相关性肝细胞肝癌的发病相关联,除此之外,前S1、前S2、BCP和增强子2区域的基因突变也参与到乙肝相关性肝细胞肝癌的风险的病例对照研究中。有研究表明这上述区域中的几种基因突变与肝细胞癌的发展存在相关性。然而,目前只有少数针对乙肝相关性肝细胞肝癌患者中上述基因突变的预后价值的研究,尤其针对HBX基因区域。通过测定肝组织样本中乙型病毒性肝炎DNA,Yeh等人发现核心启动子组分A1752T/1764A的突变是肝细胞癌患者术后预后的独立预测因子。在当前的研究中我们通过利用来自乙肝相关性肝细胞肝癌患者肝癌组织样本中的乙肝病毒DNA测定出乙型肝炎病毒X的基因序列,并用该序列来鉴定识别与术后生存相关的基因突变序列。方法:1研究对象及随访:选取2007-2009两年间在河北医科大学第四医院肝胆外科行肝癌切除术的患者,通过影像学检查、组织病理明确诊断为肝细胞肝癌。采集肝细胞癌患者术中切除的肝癌组织标本,并准确记录所有患者的性别、年龄、肿瘤大小、TNM分期、Child分级等临床特征。通过门诊复查、电话等方式随访肝癌患者术后的生存情况,随访时间截止到2014年12月。2基因组DNA提取、扩增及测序:用DNA纯化试剂盒提取肝癌组织标本的基因组DNA,鉴定合格后,采用PCR技术扩增目的片段,设计两对引物对目的片段进行扩增,引物分别为:HBV1F:5'-ATGCGTGGAACCTTTGTG-3',HBV1R:5'-TCGGTCGTTGACATTGCT-3';HBV2F:5'-CACCTCTGCACGTAGCAT-3',HBV2R:5'-TCCCATACAGAGCAGAG-3'。扩增所得DNA产物通过琼脂糖凝胶电泳检测证实后送测序,每个标本选用双向重复测序。3统计分析:单因素分析中使用Kaplan-Meier的方法来生成生存曲线,曲线之间的比较所用的方法是对数秩检验。多因素分析采用Cox风险回归模型。实验数据均采用SPSS13.0软件进行统计学分析,P0.05被认为有统计学意义。结果:1乙肝相关性肝细胞肝癌患者的一般特征。本研究包括总共106例乙肝相关性肝细胞肝癌患者,对这些患者每3个月进行一次随访,随访时间3年。其间有7例患者失去联系,失访率低于20%,对分析研究无影响。将上述肝癌DNA从肝细胞癌组织中提取用于病毒学分析,平均乙肝病毒DNA水平是5×109±2.616×1010复制量/微克,其中最大复制量1.97×1011,最小复制量1.39×104。经DNA序列测定,本研究发现在HBV X区域存在114个核苷酸突变。检测发现突变率最高的位点是1386核苷酸位点,有74例患者存在此突变。经统计学相关性分析,乙肝病毒DNA复制水平与基因突变数量并无相关性(P=0.146)。2本研究选择携带B型或C型乙肝病毒基因型的共94例肝细胞肝癌术后患者进行生存分析。选择可能影响术后生存率的临床特征(性别、年龄、肿瘤数目、Child分级、基因型、肿瘤大小、TNM分期、门脉瘤栓)进行单因素分析。结果显示,肝细胞癌术后男性与女性的3年生存率比较无差异(P=0.415);年龄分组以55岁为界限,比较≤55岁与55岁两组的3年生存率无统计学意义(P=0.324);肝细胞癌患者的肿瘤数目(单发与多发,P=0.922)、Child分级(A与B,P=0.446)、TNM分期(Ⅰ期与Ⅱ期+ⅢA期+ⅢB期,P=0.227)与患者术后生存时间无关。然而,肿瘤大小(≤55与55岁,P=0.016)、门脉瘤栓(有与无,P=0.001)与这些患者的术后生存率相关联。经过DNA测序,统计发生突变的核苷酸位点,发现高于5%突变率的突变位点总共有21个,这些位点用于生存分析研究。在21个突变位点中,经过秩检验和Kaplan-Meier法分析,以下7个位点突变在统计学重要水平上影响肝癌术后生存率:1383,1461,1485,1544,1613,1653和1762。基于Cox比例风险模型的多变量生存分析,结果表明门脉瘤栓是乙肝相关性肝细胞肝癌患者术后生存率的独立影响因素。在突变位点中,以下4个突变位点是乙肝相关性肝细胞肝癌患者术后生存率的独立影响因素:1461(相关风险(RR)3.162,95%置信区间(CI)1.319-7.582,P=0.010),1485(RR 1.989,95%CI 1.054-3.751,P=0.034),1544(RR 2.602,95%CI 1.040-6.513,P=0.041),1653(RR 2.652,95%CI 1.184-5.938,P=0.018)。3病毒学参数与肝癌病人术后生存率的相关性病毒学因素中,患者的基因型、HBV DNA复制水平、E抗原状态和突变数目通过Kaplan-Meier生存分析法进行比较,结果显示:HBV DNA复制水平(6.0E+08与≥6.0E+08,P=0.061)与肝癌患者术后生存率的关系在重要水平的临界线上,而患者的基因型、E抗原状态、突变数目与肝癌患者术后生存时间不相关。结论:我们研究的HBV X基因的4个核苷酸位点突变:1461、1485、1544、1653是乙肝相关性肝细胞肝癌患者术后生存率的独立影响因素。在临床特征中,门脉瘤栓是乙肝相关性肝细胞肝癌患者术后生存率的独立影响因素。

【关键词】：
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.7;R512.62
【目录】：

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1 ;Polymorphism Analyses of Hepatitis B Virus X Gene in Hepatocellular Carcinoma Patients from Southern China[J];Acta Biochimica et Biophysica Sinica;2007年04期

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1 陈美娅;周飞;毛乾国;卢雅丕;陈建民;王琳;任建林;董菁;;乙型肝炎病毒核心启动子缺失突变的初步观察[J];中国肝脏病杂志(电子版);2008年01期

2 曾小冬;何金秋;;乙型肝炎病毒X基因与肝癌关系的研究进展[J];广东医学;2014年11期

3 祝玲玲;朱平安;蔡兰兰;金娴;施培瑶;吴翔;;乙肝病毒HBx-d382与HBx-d431突变体特异性抗体检测方法的建立及临床应用[J];中南医学科学杂志;2014年03期

4 陈出新;祝玲玲;梁汉章;樊春卉;赖秀花;;HBV基因型与HBx基因变异的研究[J];热带医学杂志;2010年07期

5 龙熙德;朱平安;陈莉;谭德明;;HBx基因缺失型突变体对肝细胞QSG7701细胞增殖和凋亡的影响[J];热带医学杂志;2011年08期

6 山长亮;张帅;张晓东;叶丽虹;;乙肝病毒X蛋白突变体(HBxΔ127)通过ERK上调钙蛋白酶小亚基1促进肝癌细胞迁移[J];中国生物化学与分子生物学报;2011年05期

7 祝玲玲;朱平安;金娴;熊玮平;吴翔;;肝细胞癌组织中乙肝病毒HBx-d382突变体S区基因分析[J];热带医学杂志;2014年07期

8 祝玲玲;朱平安;吴翔;金娴;张东方;樊春卉;;乙肝病毒突变体HBx-d382 PCR检测方法的建立及临床应用[J];热带医学杂志;2014年05期

9 祝玲玲;朱平安;金娴;钟小婷;吴翔;樊春卉;;乙肝病毒突变体HBx-d382特异性抗体的制备及鉴定[J];实用预防医学;2014年07期

10 朱平安;祝玲玲;黄巧梅;谭德明;;乙型肝炎病毒X基因突变与肝细胞癌[J];胃肠病学和肝病学杂志;2009年12期

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4 曾小冬;乙型肝炎病毒X蛋白在肝细胞癌中的表达及其与HBVDNA的关系及意义[D];南昌大学;2014年

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5 何俊玉;;抑癌基因在肝细胞肝癌中的表达及临床意义[J];山东医药;2006年25期

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7 ;患者发生肝细胞肝癌的有效预测[J];生物学通报;2009年02期

8 夏金堂;伍兆锋;李雯;陈连周;王花;赵杰;汪谦;;组织芯片分析巨噬细胞移动抑制因子过表达与肝细胞肝癌临床病理特征的关系[J];中华普通外科学文献(电子版);2009年02期

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7 白玲;张昶;陈昊;陈乃玲;;肝细胞肝癌中凋亡相关蛋白表达与发病关系的研究[A];中华医学会病理学分会2007年学术年会暨第九届全国病理大会论文汇编[C];2007年

8 李家敏;刘素文;;质子放射治疗在肝细胞肝癌治疗中的临床应用[A];2007第六届全国放射肿瘤学学术年会论文集[C];2007年

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10 黄智铭;林胜弟;吴金明;吴建胜;陈向荣;韩清锡;陈民新;;胎盘生长因子在肝细胞肝癌和癌旁组织的表达及意义[A];2007年浙江省消化系疾病学术会议论文汇编[C];2007年

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本文编号：248629