新疆回族、柯尔克孜族HBV基因型分布特点与基因组变异规律的相关性研究
【图文】:
(9)弃去收集管,将离心柱放入一个干净的 2ml 收集管中;(10)小心的打开离心柱,加入 500μl 缓冲液 AW1, 8000rpm 离心 1 min;(11)弃去收集管及液体,将离心柱放入另一干净 2ml 收集管中,加入 500μl 缓液 AW2,14,000rpm 离心 3 min;(12)将离心柱放入干净的 1.5ml 离心管中,加入 200μl 缓冲液 AE,常温下放置min;(13)8000rpm 离心 1min,弃去离心柱,收集 DNA,-20℃保存备用。5 HBV 基因型检测5.1 实时定量 PCR 法检测 HBV 基因型本实验以 HBV 基因组中型特异性碱基的聚集区域为靶区域,在此区域内设计特的引物或探针扩增以区分不同的型别(所谓型特异性碱基是指各型在同一位置上各自对于其他型而异的碱基)。特异性引物和探针,配以热启动 DNA 聚合酶等成份组成酸扩增试剂, 使用荧光 PCR 仪进行 PCR 扩增,并检测荧光信号,,实现对未知样本的别检测。
新疆回族、柯尔克孜族 HBV 基因型分布特点与基因组变异规律的相关性研究一栏中设置样本名称;探针检测模式设置为:Reporter Dye1:FAM,Quencher Dye1:NONReporter Dye2:VIC ,Quencher Dye2:NONE,Reporter Dye3:CY5,Quencher DyNONE,Reporter Dye4:TEXAS RED,Quencher Dye2:NONE,Passive Reference:NO打开 instrument 窗口,设置循环条件:50℃ 2 分钟(1 个循环)→95℃ 15 分钟(1环)→94℃ 15 秒→55℃ 45 秒(收集荧光,45 个循环)。设置完成后,保存文件行程序。5.1.5.结果分析反应结束后自动保存结果,根据分析后图像调节 Baseline 的 Start 值、End 值Threshold 值(可根据实际情况自行调整,Start 值可以在 3~15、End 值可设在 5~在 Log 图谱窗口设置 Threshold 的 Value 值,使阈值线位于扩增曲线指数期,阴性质的扩增曲线平直或低于阈值线),点击 Analysis 自动获得分析结果,在此基础上,阈值线位置使所得标准曲线的 R2值最大即可在 Report 窗口读取检测结果。
【学位授予单位】:石河子大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2014
【分类号】:R512.62
【参考文献】
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