抗CXCL1中和抗体在急性溃疡性结肠炎小鼠模型中的治疗作用

发布时间：2019-09-23 21:05

【摘要】：目的:探讨抗CXC趋化因子配体1(CXCL1)中和抗体对葡聚糖硫酸钠(dextra sulfate sodium,DSS)诱导的急性溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)小鼠模型的治疗作用,并阐明其对结肠组织中细胞因子TNF-α,IFN-γ,IL-17,IL-10的表达及中性粒细胞浸润的影响。方法:雌性BALB/c小鼠48只,随机分为正常对照组(DSS-)、疾病组(DSS+saline)、抗CXCL1中和抗体治疗组(DSS+anti-CXCL1 Ab)和治疗对照组(DSS+IgG Ab),每组12只。正常对照组小鼠给予蒸馏水自由饮用,疾病组、治疗组及治疗对照组给予3.5%的DSS自由饮用,至第8天处理小鼠。其中治疗组于造模第3天和第6天腹腔注射抗CXCL1中和抗体(4 mg/kg),治疗对照组予以等量大鼠IgG抗体,正常对照组和疾病组注射等量生理盐水。对各组小鼠进行疾病活动指数评分(disease activity index,DAI)及结直肠组织损伤学评分,并采用RT-PCR法检测各组小鼠结肠组织中细胞因子TNF-α,IFN-γ,IL-17和IL-10的表达。运用免疫组织化学检测各组小鼠结肠组织中中性粒细胞特异性标志物髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)的表达。结果:与正常对照组相比,疾病组小鼠DAI评分及结直肠组织损伤学评分明显增高,但是予以抗CXCL1中和抗体干预治疗后能明显减低急性UC小鼠的DAI和结直肠组织损伤学评分。RT-PCR检测结果显示:与正常对照组相比,疾病组小鼠结直肠组织中促炎细胞因子TNF-α,IFN-γ和IL-17 m RNA表达水平均显著升高,抑炎因子IL-10 m RNA表达下降。而使用抗CXCL1中和抗体干预治疗,明显抑制DSS诱导的小鼠结肠组织中促炎细胞因子TNF-α,IFN-γ和IL-17 m RNA表达水平的升高及抑炎因子IL-10 m RNA表达水平的下降,差异具有统计学意义(P0.05)。免疫组织化学结果显示:疾病组小鼠结肠组织中中性粒细胞的浸润明显增加,予以抗CXCL1中和抗体治疗能显著减少结肠组织中中性粒细胞的浸润,差异具有统计学意义(P0.05)。结论:抗CXCL1中和抗体缓解了DSS诱导的急性UC的进展,其发挥抗炎作用的机制可能与抑制促炎因子的表达和中性粒细胞的浸润有关。
【图文】：

小鼠,中和抗体,疾病,肠黏膜

牢辔衷?分左右。与正常对照组相比，疾病组小鼠被毛粗糙，食欲下降，活动欠佳；小鼠粪便稀软不成形，容易黏肛，第3天开始出现明显的腹泻及肉眼血便或黏液便，体重第4天开始逐日下降，DAI评显著升高。与疾病组比较，抗CXCL1中和抗体治疗组小鼠被毛顺滑，食欲正常，活动较好，体重维持在22g，无明显下降趋势；小鼠粪便麦粒状，偏软；无肉眼血便或黏液便，DAI评分较疾病组显著下降。说明抗CXCL1中和抗体缓解了DSS诱导的急性UC的临床症状。将治疗对照组与疾病组比较，DAI评分无明显差异(P>0.05)。各组每天的DAI评分情况见图1。2.2抗CXCL1中和抗体减轻DSS诱导的急性UC的肠道炎症反应经过对小鼠肠道组织进行切片、包埋及HE染色后光镜下行病理学观察发现：正常对照组小鼠(图2A)肠道黏膜完整，未见明显充血水肿，无炎症细胞的浸润。疾病组(图2B)及治疗对照组(图2D)结肠黏膜上皮细胞和腺体破坏，大量炎症细胞浸润，肠黏膜明显充血水肿伴，肠上皮细胞损伤脱落形成溃疡，隐窝结构破坏。抗CXCL1中和抗体治疗组(图2C)腺体排列较为规则，肠道各层较完整，有少量炎症细胞浸润。对各组小鼠肠黏膜组织损伤学评分进行统计分析发现，抗CXCL1中和抗体治疗组肠道黏膜组织损伤学评分相比疾病组明显降低，差异有统计学意义(P<0.05)。肠黏膜组织损伤学评分见图3。表2IL-2，IFN-γ，IL-17和IL-10及内参基因GAPDH的引物序列Table2PrimersequencesofIL-2,IFN-γ,IL-4,IL-10andGAPDH基因序列PCR产物长度/bpTNF-α5'-GAGAAGTTCCCAAATGGC-3'2133'-GCATCGTTTGGTGGTTCA-5'INF-γ5'-GCCGCGTCTTGGTTTTGCAG-3'1753'-TACCGTCCTTTTGCCAGTTCCTCCA-5'IL-105'-TCCCAGTCAGCCAGACCCACA-3'2893'-AATCGATGACAGCGTCGCAGC-5'IL-175'-CAGACTACCTCAACCGTTCCA-3'2513'-C

小鼠,中和抗体,小鼠模型

抗CXCL1中和抗体在急性溃疡性结肠炎小鼠模型中的治疗作用罗玲珑，等1379图2各组小鼠肠黏膜HE染色(×100)Figure2HEstainningofcolonmucosaofmiceineachgroup(×100)A:DSS-group;B:DSS+salinegroup;C:DSS+anti-CXCL1Abgroup;D:DSS+IgGAbgroup20μm20μmACBD图3各组小鼠组织损伤学评分Figure3Histologicaldamagescaleofmiceineachgroup*P<0.05DSS+anti-CXCL1AbDSS+lgGAbDSS+salineDSS 86420Tisseudamagescroe**图4各组小鼠结直肠组织TNF-α，IFN-γ，IL-10，IL-17的mRNA的表达Figure4mRNAexpressionofTNF-α,IFN-γ,IL-10andIL-17incolorectaltissuesofmiceineachgroup*P<0.05DSS+anti-ControlAbDSS+anti-CXCL1AbDSS+salineDSS TNF-αTNF-γIL-10IL-17543210RelatvieelvelfoRmAN********2.3抗CXCL1中和抗体抑制小鼠结肠组织促炎因子的表达并促进抑炎因子的表达利用RT-PCR检测各组小鼠结肠组织中TNF-α，IFN-γ，IL-17和IL-10的表达，结果发现与正常组比较，疾病组小鼠结肠组织中促炎因子TNF-α，IFN-γ和IL-17含量均明显增加，抑炎因子IL-10含量降低(P<0.05)。而与疾病组比较，抗CXCL1中和抗体治疗组结肠组织中促炎因子TNF-α，IFN-γ和IL-17均明显下降，，抑炎因子IL-10的表达升高，差异具有统计学意义(P<0.05，图4)。20μm20μm
【作者单位】：中南大学湘雅三医院消化内科;中南大学湘雅三医院湖南省非可控性炎症与肿瘤重点实验室;中南大学肿瘤研究所;
【基金】：国家自然科学基金面上项目(81472286) 湖南省自然科学基金(11JJ4017)~~
【分类号】：R-332;R574.62

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