大蒜素对大鼠肝星状细胞Bcl-2蛋白表达的影响

发布时间：2019-10-12 10:24

【摘要】：目的:研究大蒜素对大鼠肝星状细胞增殖和Bcl-2蛋白表达的影响,初步探讨大蒜素诱导肝星状细胞凋亡相关机制。方法:大鼠肝星状细胞HSC-T6生长于体积分数为10%胎牛血清及1×105 IU/L青霉素、100 mg/L链霉素的DMEM培养基中,在37℃、饱和湿度、5%CO2孵箱中常规培养。以25、50、100、200μmol/L大蒜素分别作用于HSC-T6细胞0、6、12、24和48 h后,利用倒置相差显微镜及透射电镜观察HSC-T6细胞数量及形态学变化;MTS比色法检测细胞存活率;qRT-PCR检测HSC-T6细胞Bcl-2 mRNA相对表达量;Western blotting检测HSC-T6细胞中Bcl-2、Bax以及Cleaved caspase-3蛋白的相对表达水平。用SPSS17.0统计学软件进行单因素方差分析,组间两两比较采用LSD法,计量数据以均数±标准差(X±SD)表示,以P0.05或P0.01为差异有统计学意义。结果:1.大蒜素对HSC-T6细胞形态的影响:不同浓度大蒜素作用于HSC-T6细胞48 h后,对照组细胞密度较大,形态呈长梭形;大蒜素组随着药物浓度的升高,细胞密度和体积逐渐变小,多角伪足减少甚至消失,形态呈椭圆形。100μmol/L大蒜素作用于HSC-T6细胞一定时间后,随着作用时间的延长,细胞数目逐渐变少,体积变小,多角伪足减少。2.大蒜素对细胞生长的抑制作用:不同浓度大蒜素作用于HSC-T6细胞不同的时间后,细胞存活率结果提示大蒜素对HSC-T6的增殖具有抑制作用,且作用呈剂量和时间依赖性。25μmol/L大蒜素分别作用于HSC-T6细胞12、24和48 h后,细胞存活率明显下降(P0.01);50、100、200μmol/L大蒜素分别作用于HSC-T6细胞6、12、24和48 h后,细胞存活率明显下降(P0.05或P0.01)。3.细胞超微结构的变化:100μmol/L大蒜素作用于HSC-T6细胞12 h后,对照组细胞结构完整,细胞核中染色质分布均匀;大蒜素组细胞核固缩,核染色质浓缩凝集成团块状,可见核碎片和凋亡小体形成。4.大蒜素对HSC-T6细胞Bcl-2基因表达的影响:不同浓度大蒜素作用于HSC-T6细胞48 h后,随着药物浓度的升高,Bcl-2基因表达逐渐下调。与对照组相比,各大蒜素组Bcl-2基因表达均明显下调(P0.01)。5.大蒜素对HSC-T6细胞Bcl-2、Bax和Cleaved caspase-3蛋白表达的影响:不同浓度大蒜素作用于HSC-T6细胞48 h后,随着药物浓度的升高,Bcl-2蛋白表达逐渐下调,而Bax和Cleaved caspase-3蛋白表达逐渐上调,Bax/Bcl-2比值逐渐升高。大蒜素浓度为25、50、100和200μmol/L,随着药物浓度的升高,Bax以及Cleaved caspase-3表达上调(P0.05或P0.01);大蒜素浓度为50、100和200μmol/L,随着药物浓度的升高,Bcl-2蛋白表达下调,Bax/Bcl-2的比值升高(P0.05或P0.01)。结论:1.大蒜素对HSC-T6细胞增殖具有抑制作用,且作用具有剂量与时间依赖性。2.大蒜素可诱导HSC-T6凋亡,其机制可能与下调Bcl-2蛋白表达,上调Bax以及Cleaved caspase-3蛋白表达有关。
【图文】：

HSC-T6细胞,多角,伪足

大蒜素对大鼠肝星状细胞 Bcl-2 蛋白表达的影响第三章结果(Results)ATS 对 HSC-T6 细胞数量和形态学的影响倒置相差显微镜观察结果显示，不同浓度 DATS 作用 HSC-T6 细胞 48 h 后，可见细胞密度较大，细胞贴壁生长，形态呈长梭形，有多角伪足。在 DATS 组，可见物 DATS 浓度升高，HSC-T6 细胞数量逐渐减少，DATS 浓度为 100 μmol/L 和 2l/L 时可见细胞数量较对照组明显减少，细胞体积变小，呈椭圆形，多角伪足减少失，见图 1。100 μmol/L DATS 分别作用于 HSC-T6 细胞 6、12、24 和 48 h 后，示在作用时间为 6 h 时，细胞数目较少，形态呈长椭圆形，细胞悬浮在培养基中药物 DATS 作用时间的延长，细胞贴壁生长，形态呈长梭形或星形，有多角伪足溶剂对照组细胞培育 48 h 后，细胞呈长梭形，融合度为 100%。DATS 100 μmol胞数目较溶剂对照组明显减少，，细胞增殖抑制作用较明显，见图 2。

HSC-T6细胞,抑制作用,细胞的,细胞存活率

图 2 100 μmol/L DATS 作用不同时间后，HSC-T6 细胞的形态学变化（×200）A：溶剂对照组 48 h；B：DATS100 μmol/L 6 h；C：DATS100 μmol/L 12 h；D：DATS100 μmol/L 24 h；E：DATS100 μmol/L 48 hATS 对 HSC-T6 细胞的增殖抑制作用MTS 比色法检测结果显示，DATS 对 HSC-T6 的增殖具有抑制作用。DATS 25 μm于 HSC-T6 12 h 即显示出明显的细胞增殖抑制作用（P<0.01），且随着 DATS 作的延长，细胞存活率逐渐降低。DATS 50 μmol/L、100 μmol/L 和 200 μmol/L 分别 HSC-T6 细胞 6、12、24 和 48 h 均显示出明显的增殖抑制作用（P<0.05 或 P<0.0 DATS 浓度的增高以及作用时间的延长，HSC-T6 细胞的存活率逐渐降低，DATSC-T6 细胞的增殖抑制作用逐渐增强。见图 3、表 1。
【学位授予单位】：石河子大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R575

【参考文献】