白藜芦醇通过调节自噬保护酒精性脂肪肝

发布时间：2020-01-17 16:02

【摘要】：酒精性脂肪肝(alcoholic fatty liver, AFL)作为潜在发展的病理机制,是长期大量饮酒所致的肝脏疾病,近年来,死亡率有增高趋势。酒精是酒精性脂肪肝的高危因素,因为乙醇的代谢产物直接或间接影响氧化应激和脂质过氧化,使脂肪肝病情加重,或可演变为肝硬化甚至肝癌。白藜芦醇(Resveratrol, RES)是一种主要来源于花生、葡萄的酚类化合物,具有很强的抗氧化作用,也是一种安全、有效的保肝药物。前期研究发现,白藜芦醇对酒精性脂肪肝具有保护作用,但其对酒精诱导的肝脂肪变性的作用机理尚不完全清楚。自噬(autophagy)是一种常见的细胞内“自食”现象,自噬的形成可概括如下：首先细胞膜包裹细胞内需要降解的细胞器等形成自噬体,自噬体与溶酶体融合后,自噬体的包含物被降解,以实现细胞稳态和细胞器的更新。自噬是真核细胞内的一种大分子物质降解机制,其依赖溶酶体降解受损的细胞器和蛋白质,是维持能量平衡必不可少的条件。自噬是一种动态过程,在基础状态也可发生自噬(基础自噬),因此自噬在维持细胞的动态平衡,应对外界环境变化,清除受损的蛋白质等方面扮演重要角色。研究表明,自噬在不同的酒精性肝病中发挥着不同的作用,通过调节自噬预防和治疗肝脏疾病有望成为一种新的靶向策略,也成为近年研究的热点之一。目的：本研究旨在通过自噬途径研究白藜芦醇对酒精性脂肪肝的保护作用机制,并进一步探讨SREBP-1c/ACC在此机制中的作用。方法：采用Lieber-DeCarli酒精液体饮食加一次急性酒精灌胃的方法,建立小鼠酒精性脂肪肝模型。RES灌胃给药,造模周期16天,于第16天灌胃酒精,9小时后处死小鼠,测定肝脏及血清中谷草转氨酶(AST),谷丙转氨酶(ALT),甘油三酯(TG),低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)及高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平,组织HE染色观察小鼠肝脏病理学变化,透射电镜检测自噬体情况,Western blot检测自噬相关蛋白LC3、Beclin1和p62的表达,以及SREBP-lc/ACC蛋白的表达。同时采用酒精联合油酸共同刺激HepG2细胞建立体外肝细胞脂质蓄积模型,MTT检测细胞活性,油红O染色对体外模型进行评价,试剂盒检测细胞内TG水平,吖啶橙染色评估自噬溶酶体变化,Western blot检测自噬相关蛋白LC3、Beclin1和p62的表达,以及SREBP-lc/ACC蛋白在加入AMPK抑制剂Compound C后的表达变化。结果：1 病理学检查结果显示,与正常组相比,模型组可见明显的脂肪空泡,表明小鼠酒精性脂肪肝模型建立成功,RES给药后可显著改善肝脏的脂肪变性程度。生物学指标检测表明,RES可显著降低血清ALT、AST、LDL-C和TG水平,升高血清HLD-C的水平。以上结果提示,RES对AFL小鼠有明显的保护作用。2 与AFL小鼠模型组比较,RES给药组可见明显自噬体形成,RES给药可增加自噬蛋白LC3和Beclin1的表达,降低p62的表达。结果提示白藜芦醇对小鼠酒精性脂肪肝的防治作用,可能与其诱导自噬有关。与正常对照组比较,模型组SREBP-1c表达显著增加,ACC的磷酸化水平显著降低；RES用药后显著增加ACC的磷酸化水平,降低了SREBP-1c的表达,结果提示,白藜芦醇能够调节脂质代谢,减轻脂质沉积,保护小鼠酒精性脂肪肝。3 乙醇和油酸刺激的HepG2细胞脂质积累模型中,油红O染色和细胞内TG检测证明体外脂质积累细胞模型成功。与对照组比较,模型组细胞中红色脂滴明显增加,RES用药后细胞中脂滴显著降低。细胞内TG水平检测结果显示,与正常组比较,模型组细胞内TG的含量明显升高,RES用药后显著降低了细胞内TG的水平。这些结果表明RES能改善乙醇和油酸刺激的HepG2细胞脂质积累。4 与乙醇和油酸刺激的HepG2细胞模型组比较,吖啶橙染色结果显示RES诱导自噬溶酶体的形成,增加自噬蛋白LC3和Beclin1的表达,降低p62的表达,而自噬抑制剂3-MA抑制了RES这一效应,表明RES可能通过诱导自噬缓解HepG2细胞脂质积累。与对照组比较,模型组ACC的磷酸化水平显著降低,SREBP-1c表达显著增加：RES用药后显著增加ACC的磷酸化水平,降低了SREBP-1c的表达,而AMPK抑制剂Compound C逆转了RES的这一效应,同时Compound C抑制自噬标志蛋白LC3的表达。这表明RES诱导自噬缓解HepG2细胞脂质积累可能与激活SREBP-1c/ACC信号通路有关。结论：白藜芦醇可通过诱导自噬发挥对酒精性脂肪肝的保护作用,并且与激活SREBP-1c/ACC有关。
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R575.5

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本文编号：2570666