重组人肝细胞生长因子在毕赤酵母中的表达

发布时间：2020-02-21 04:55

【摘要】：目的:1.建立有效的真核表达体系。2.分泌表达出具有生物活性的HGF蛋白。方法:本研究首次利用p GAPZαA这一真核表达载体表达HGF蛋白。我们从gene bank上找到HGF全长片段,然后根据真核表达偏爱密码子将其合成。为得到二级结构的HGF蛋白,我们在494位氨基酸Arg和495位氨基酸Val间添加了肠激酶序列。将HGF和p GAPZαA质粒双酶切后行连接转化,构建穿梭载体p GAPZαA-HGF,测序后将穿梭载体进行线性化,然后电转化入毕赤酵母GS115进行表达,分别在24h,48h,72h,96h取样。将得到的蛋白行亲和层析纯化,然后行Western Blot检测。最后分离小鼠原代肝细胞,采用MTT法检测HGF蛋白的生物学活性。结果:成功构建了p GAPZαA-HGF穿梭质粒,Western Blot检测显示80k Da左右有阳性条带,HGF蛋白成功表达,在48h时表达量较好,浓度为16.6mg/L,并且得到的HGF蛋白具有生物学活性。结论:建立了有效的真核表达体系,分泌表达出具有生物活性的HGF蛋白,为真核表达HGF蛋白提供了实验依据,为后续大量表达HGF蛋白提供了可行性。
【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R575

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本文编号：2581532