长链非编码RNA-MEG3在急性胰腺炎中对外分泌细胞凋亡作用及其临床意义的研究

发布时间：2020-03-21 13:39

【摘要】：目的研究长链非编码RNA-MEG3(lncRNA-MEG3,lncR-MEG3)在急性胰腺炎中的临床意义,及其同系物LncR-RGD1566401对大鼠胰腺外分泌细胞的凋亡作用。方法LncR-RGD1566401是位于大鼠染色体6q32的母系印迹基因,长度为1,915bp,是母系表达基因3(MEG3)的同源类似物。用携带有lncR-RGD1566401目的基因的慢病毒(Lenti-LncRNA)和特异性lncR-RGD1566401抑制剂(lncRNA Smart Silencer)转染AR42J细胞系24h,转染空病毒(Lenti-NC)和特异性lncR-RGD1566401阴性抑制剂(lncRNA smart silencer negative control)作为对照;以100 nmol/L雨蛙肽(Caerulin)体外诱导正常培养AR42J及转染后AR42J的凋亡,使用药物诱导凋亡24h以后,采用流式细胞技术(Flow cytometry,FCM)检测各组AR42J细胞的凋亡率,使用实时荧光定量RT-PCR法检测各组lncR-RGD1566401的表达量,而后采用蛋白质印迹法(Western blot)检测各组凋亡蛋白活性Caspase-3和P53表达量的变化。同时收集郑州大学人民医院2016年1月至2017年1月的急性胰腺炎患者63例,其中重症急性胰腺炎(serve acute pancreatitis,SAP)21例,轻症急性胰腺炎(mild acute pancreatitis,MAP)42例。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测患者入院后24h血清lncR-MEG3的表达水平,比较各组间lncR-MEG3、C反应蛋白(CRP)、D-二聚体(D-Dimer)浓度差异。使用SPSS22.0软件进行统计学分析获得的数据,然后制作受试者工作特征曲线(ROC曲线),进一步评价该血清学指标对SAP的诊断效能。结果雨蛙肽体外诱导AR42J凋亡的凋亡率(19.34±0.54)%较对照组(7.23±0.33)%明显升高,lncR-RGD1566401表达量较对照组升高(5.43±0.31)倍,活性Caspase-3和P53表达量明显升高;转染携带有lncR-RGD1566401目的基因的慢病毒组lncR-RGD1566401表达量较空病毒组升高(8.24±0.22)倍(p0.05);AR42J凋亡率(38.20±0.37)%较空病毒组(22.60±0.96)%明显升高(p0.05);活性Caspase-3和P53表达量明显升高(p0.05);应用特异性lncR-RGD1566401抑制剂组较阴性对照组lncR-RGD1566401表达量降低(0.54±0.14)倍,(p0.05),AR42J凋亡率(13.60±0.33)%较阴性对照组(19.60±0.46)%显著降低,(p0.05),P53表达量和凋亡蛋白活性Caspase-3明显降低(p0.05)。在收集的临床血清样本中,患者血清lncR-MEG3的表达水平在SAP组较MAP组显著降低(p0.05),CRP、D-Dimer浓度显著升高(p0.05);lncR-MEG3、CRP和D-Dimer联合检测应用于诊断急性重症胰腺炎时的曲线下面积(AUC)高于CRP和D-Dimer联合的AUC,也高于lncR-MEG3、CRP、D-Dimer单独使用时的AUC。结论1.lncR-RGD1566401与大鼠AR42J细胞凋亡相关;2.上调lncR-RGD1566401表达水平,AR42J细胞凋亡率增加;下调lncR-RGD1566401表达量,AR42J细胞凋亡率降低;3.MAP组患者血清lncR-MEG3表达量较SAP组lncR-MEG3表达量升高明显;4.联合lncR-MEG3、CRP、D-Dimer指标诊断急性重症胰腺炎的诊断效能显著高于单独指标或CRP与D-Dimer联合指标;5.lncR-MEG3表达水平可以在早期反映AP患者病情严重程度,lncR-MEG3可能是潜在的作为区分MAP和SAP的血清学生物标志物。
【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R576

【参考文献】

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本文编号：2593413