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甲基阿魏酸对人肝星状细胞的增殖抑制作用及对α-SMA和Ⅰ型胶原表达的影响

发布时间:2017-03-21 14:00

  本文关键词:甲基阿魏酸对人肝星状细胞的增殖抑制作用及对α-SMA和Ⅰ型胶原表达的影响,由笔耕文化传播整理发布。


【摘要】:肝纤维化(hepatic fibrosis, HF)是由多种原因引起的慢性肝损伤所致的病理改变,肝实质发生持续或反复的炎症坏死,肝脏内纤维结缔组织降解相对不足,从而引起纤维结缔组织大量增生,出现了肝脏细胞外基质成分过度异常地沉积的现象,从而形成肝纤维化,进一步发展则形成肝硬化。肝纤维化的主要病因包括病毒性肝炎、酒精中毒以及胆道梗阻等。如果能给予有效的治疗,可使肝纤维化的程度减轻,使其逆转。肝星状细胞(Hepaticstellate cell,HSC)是形成肝纤维化的主要细胞,是细胞外基质(Extracellularmatrix,ECM)成分的主要来源。正常情况下HSC主要储存维生素A并少量增殖,合成少量胶原。然而,肝损伤后HSC内维生素A消失,肝星状细胞转化成肌成纤维样细胞,即活化的HSC。活化状态的HSC能够合成和分泌ECM,导致ECM在肝内过量沉积,并表达α-平滑肌肌动蛋白(α-smoothmuscle actin,α-SMA)。 转化生长因子β1(Transforming growth factor beta1,TGF-β1)能够促进HSC转化为肌成纤维样细胞,使细胞外基质的产生增加和降解减少,并抑制肝细胞的再生及诱导凋亡。TGF-β1在肝纤维化的发生发展中起重要作用,被认为是目前最强的致纤维化因子。 多种原因引起的慢性肝脏疾病严重威胁着我国人民的健康,寻求有效的抗肝纤维化药物是当前的研究热点。如今,许多研究将肝星状细胞作为抗肝纤维化的中心环节,但尚无特异的治疗方法。蝉翼藤为广西民族特色中草药,民间常用于治疗急性黄疸性肝炎等。本课题组从蝉翼藤茎皮中提取分离纯化得到甲基阿魏酸(Methyl ferulic acid,MFA),探讨其在HSC活化增殖过程中的影响及其作用的分子机制。对开发抗肝纤维化新药具有重要意义。 目的:探讨MFA对人肝星状细胞(HSC-LX2)增殖的影响,及对α-SMA和Ⅰ型胶原的mRNA及α-SMA蛋白表达的影响及其可能的作用机制。 方法:以人肝星状细胞作为研究对象,用MTT法检测MFA对HSC-LX2细胞增殖的影响及检测5ng/ml的TGF-β1作用48h后,对HSC-LX2增殖的影响;将TGF-β1刺激的人肝星状细胞制造肝纤维化的氧化应激模型,并在此基础上应用不同剂量的MFA对各组细胞进行干预,应用RT-PCR方法检测不同浓度的MFA对TGF-β1刺激的HSC-LX2α-SMA和Ⅰ型胶原的mRNA表达;用Western blot技术检测不同浓度的MFA对TGF-β1刺激的HSC-LX2α-SMA蛋白的表达。 结果:①MTT检测结果显示,MFA作用48h后对HSC-LX2的增殖具有抑制作用(P0.05)。与正常对照组相比,TGF-β1浓度为5ng/ml时能明显促进HSC-LX2的增殖(P0.05)。②RT-PCR检测结果显示,MFA作用48后能降低TGF-β1刺激的HSC-LX2α-SMA和Ⅰ型胶原mRNA的表达(P0.05),且以低浓度MFA(5μg/ml)最为明显,高、中剂量MFA(10μg/ml、5μg/ml)对HSC-LX2的α-SMA和Ⅰ型胶原mRNA的表达也有抑制作用(P0.05)。③Western blot技术检测结果显示,中、低浓度MFA(10μg/ml、5μg/ml)明显降低HSC-LX2α-SMA蛋白的表达(P0.01),,高剂量MFA对HSC-LX2α-SMA蛋白的表达没有明显的抑制作用。 结论:①甲基阿魏酸可抑制人肝星状细胞的增殖。②甲基阿魏酸预处理TGF-β1刺激的人肝星状细胞可下调α-SMA和Ⅰ型胶原的mRNA的表达及降低α-SMA蛋白水平,从而推断甲基阿魏酸可以抑制HSC增殖及活化,具有抑制肝纤维化发生发展的作用。
【关键词】:TGF-β 肝星状细胞 肝纤维化 甲基阿魏酸
【学位授予单位】:桂林医学院
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2014
【分类号】:R575.2
【目录】:
  • 中文摘要5-8
  • ABSTRACT8-12
  • 英汉缩略词对照表12-14
  • 前言14-16
  • 1 材料与方法16-36
  • 1.1 主要实验试剂16-18
  • 1.2 主要实验仪器18
  • 1.3 实验方法18-36
  • 2 结果36-42
  • 2.1 MTT 的结果及分析36-37
  • 2.2 MFA 对 TGF-β1刺激 HSC-LX2 α-SMAmRNA 表达的影响37-38
  • 2.3 MFA 对 TGF-β1刺激 HSC-LX2 Ⅰ型胶原 mRNA 表达的影响38-40
  • 2.4 MFA 对 TGF-β1刺激 HSC-LX2 α-SMA 蛋白表达的影响40-42
  • 3 讨论42-50
  • 3.1 肝纤维化的发病机制42-44
  • 3.2 TGF-β1 与肝纤维化44-45
  • 3.3 甲基阿魏酸相关的药理研究45-46
  • 3.4 根据实验结果进行讨论46-50
  • 4 结论50
  • 参考文献50-56
  • 综述56-71
  • 参考文献63-71
  • 攻读学位期间发表的学术论文目录71
  • 致谢71

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 田晓丽;杨杰;;转化生长因子-β研究进展[J];解放军预防医学杂志;2006年02期


  本文关键词:甲基阿魏酸对人肝星状细胞的增殖抑制作用及对α-SMA和Ⅰ型胶原表达的影响,由笔耕文化传播整理发布。



本文编号:259724

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