内皮祖细胞和间充质干细胞携带乙型肝炎病毒修复组织功能的基础研究

发布时间：2020-03-26 11:14

【摘要】： 研究背景：既往研究表明，乙肝病毒(HBV)在肝外组织的复制引起诸如乙肝相关性病毒性心肌炎等多种肝外表现，但是乙肝病毒如何传染肝外组织引起如乙肝相关性病毒性心肌炎等临床表现，其发病机理仍然不清。 目的：为了探讨人内皮祖细胞(EPCs)和人及鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)是否能被HBV感染，具有携带HBV而修复肝外损伤的组织，进一步研究乙肝病毒肝外表现的发病机理。同时，探讨HBV传染的种属同源性问题。 方法：在本研究中，我们用乙肝病毒高拷贝阳性血清感染人脐带血内皮祖细胞、人和SD大鼠骨髓间充质干细胞及SD乳鼠心肌细胞，并将感染的祖／干细胞移植入心肌梗死模型和急性肾缺血模型的SD大鼠。免疫组化、流式细胞仪、PCR和透射电镜检测体外培养的细胞，同时免疫组化和免疫荧光检测SD大鼠的各脏器组织。 结果：本研究发现，在体外培养系统中用乙肝病毒对祖／干细胞、SD乳鼠心肌细胞和人脐静脉内皮细胞(HUVECs)进行干预，人内皮祖细胞可通过吞噬乙肝病毒而引起感染，骨髓间充质干细胞也可被HBV感染，但不感染人脐静脉内皮细胞和SD乳鼠心肌细胞。在人内皮祖细胞和骨髓间充质干细胞可检测到HBV DNA和变异的乙肝病毒颗粒，并在以后的维持培养中逐渐下降以至于消失。同时，乙肝表面抗原(HBsAg)和核心抗原(HBcAg)也在内皮祖细胞、人和鼠的骨髓间充质干细胞表达。但是，HBV共价闭合环状DNA(HBV cccDNA)始终是阴性。在体研究发现，在心肌梗死周边部和继发性损伤的肾、肺和肝组织，免疫组化和免疫荧光均发现乙肝抗原的表达。 结论：乙肝病毒不能感染乳鼠的心肌细胞，但能感染SD大鼠间充质干细胞和人间充质干细胞，病毒对不同种属的干细胞的感染可能是人畜共患性疾病的感染基础。 内皮祖细胞和人骨髓间充质干细胞可被乙肝病毒感染，但不在这两种细胞中复制，并将乙肝病毒携带至被修复的组织，这充分说明内皮祖细胞和骨髓间充质干细胞带乙肝病毒修复组织的功能是乙肝病毒性心肌炎和其他乙肝肝外表现的发病机理之一。意味着干细胞具有带病毒修复组织的功能，这也可能是病毒性疾病和病毒相关性肿瘤疾病的发病机理之一。
【图文】：

图2MSC免疫表型和细胞周期2.2.MSC是乙肝病毒感染的靶细胞为了观察MSC是否能被乙肝病毒感染，我们把培养的细胞分为4组，即病毒血清干预组和正常人血清干预组，将培养的第3代MSC在接种于含玻片的培养皿时开始干预，千预2天后换新鲜培养液，继续维持培养1一2天。免疫组化表明，病毒血清干预组HBcAg在干预3天后开始表达(图3.IB)，主要在细胞质发现(图3.le，3.ID)。正常血清Mse

2.3.透射电镜检测用透射电镜检测病毒干预后的MSC发现，在细胞质内偶见到大小不等的病毒颗粒见图4A，，比内皮祖细胞中少得多(见第二章Fig.SA一SC)。这种HBv病毒颗粒为圆形或椭圆形病毒颗粒，直径大小在 50to200nm，大多数直径在 80nm左右。在电镜下计算5个不同20，000倍视野的平均数的HBV颗粒为2.5士2.1个;这些病毒颗粒主要在细胞质内，而不在粗面内质网(RER)和细胞核中。细胞传代后消失。在正常人血清干
【学位授予单位】：南京医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2007
【分类号】：R512.62

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本文编号：2601364