不同细胞表面TLR4受体表达在小鼠重症急性胰腺炎中的作用

发布时间：2020-03-26 16:24

【摘要】： 目的:探索髓系细胞(中性粒细胞、血小板)及内皮细胞表面Toll样受体表达在重症急性胰腺炎中性粒细胞招募中的作用。方法:将C3H/He-J和C3H/He-N小鼠通过骨髓移植的方法制作“①髓系细胞TLR4-/-和内皮细胞TLR4+/+”及“②髓系细胞TLR4+/+和内皮细胞TLR4-/-”嵌合体小鼠,然后以①②及纯合体小鼠(③TLR4+/+,④TLR4-/-)为对象,腹腔注射蛙皮素、尾静脉注射脂多糖复制SAP模型,检测血浆淀粉酶、胰腺组织萘酚AS-D氯乙酸脂酶染色计数、MPO活性、PCR测外周血粒细胞TLR4、免疫组化检测胰腺组织内TLR4的表达。结果:各组小鼠血浆淀粉酶升高,组间无显著性差异;①③两组AS-D计数及MPO活性明显高于②④两组;②③两组外周血粒细胞TLR4显著高于①④两组;①③两组胰腺组织内TLR4阳性,②④两组阴性;结论:内皮细胞而非外周血粒细胞在重症急性胰腺炎中性粒细胞聚集中起关键作用。
【图文】：

标准曲线,反应曲线,荧光,稀释物

55℃ 30s, 72℃ 45s, 45 个循环在退火阶段采集荧光信号，利用 FTC2000 荧光实时定量 PCR 仪附带的分析软件对结果进行分析。3.结果分析：扩增结果采用 FTC2000 荧光 PCR 仪自带的实时荧光定量 PCR 分析程值，然后计算其相应 ΔCt 值（目的基因 TLR2Ct 值减去内参照 β-actin Ct 值ΔCt 值越小说明基因拷贝数越多）。待测样品相对值＝2（△Ct 待测样品-△Ctβ-actiCt 阴性对照- Ct 待测样品4.标准曲线以不同浓度梯度的 β-actin 核酸标准品稀释物 cDNA 为模板，运用实时PCR 的方法来明确检测体系的可重复性，如图 1-1 所示，相关系数>0.95，的前提下，其结果是可信的。

萘酚,内皮,小鼠

三、胰腺组织MPO活力水平及萘酚AS-D氯乙酸脂酶染色计数：①髓系TLR4-/-和内皮TLR4+/+③髓系TLR4+/+和内皮TLR4+/+两组相比②髓系TLR4+/+和内皮TLR4-/-④髓系TLR4-/-和内皮TLR4-/-两组，MPO水平与AS-D计数明显升高。（表2）（图1、2）表2 小鼠胰腺组织MPO活力水平及萘酚AS-D氯乙酸脂酶染色计数组别 AS-D计数（个） MPO（U/g）④髓系TLR4-/-和内皮TLR4-/- 20.00±2.19 0.202±0.018③髓系TLR4+/+和内皮TLR4+/+ 75.00±2.43 2.596±0.138②髓系TLR4+/+和内皮TLR4-/- 21.50±2.38# 0.367±0.018#①髓系TLR4-/-和内皮TLR4+/+ 66.88±2.17*& 1.834±0.170*&注：方差分析P<0.05；两两比较，与上一组比，*P<0.05;与④比，#P>0.05,&P<0.05与③比，#P<0.05,&P>0.05
【学位授予单位】：华中科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2008
【分类号】：R576

【引证文献】