4-苯基丁酸对四氯化碳诱导小鼠急性肝损伤的影响

发布时间：2017-03-21 23:11

  本文关键词：4-苯基丁酸对四氯化碳诱导小鼠急性肝损伤的影响，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的在前期实验建立四氯化碳诱导小鼠急性肝损伤模型的基础上,本实验中予以小鼠内质网应激抑制剂4-苯基丁酸(PBA)干预,探讨PBA对四氯化碳(CCl4)诱导急性肝损伤的影响,研究内质网应激对肝细胞坏死、凋亡及增殖的影响,并阐明部分机制。方法将60只成年健康雄性ICR小鼠随机分为对照组、PBA组、CCl4 12 h组、CCl424 h组、CCl4 48 h组、CCl4 72 h组、PBA+CCl4 12 h组、PBA+CCl4 24 h组、PBA+CCl448 h组、PBA+CCl4 72 h组,每组6只小鼠。对CCl4组及PBA+CCl4组小鼠经腹腔注射CCl4(300μl/kg),PBA+CCl4组小鼠在给予CCl4前经腹腔注射给予PBA(400mg/kg)处理。在CCl4处理后相应时点采集血液、处死小鼠、采集肝脏组织。检测小鼠血液中丙氨酸转氨酶(ALT)水平,使用苏木精-伊红(HE)染色法分析肝脏病理学改变,免疫组化检测肝脏增殖细胞核抗原(PCNA)分布,检测细胞凋亡情况。蛋白质印迹法检测肝脏葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、C/EBP家族同源蛋白(CHOP)、磷酸化真核生物翻译起始因子2α(p-e IF2α)、磷酸化c-Jun氨基末端激酶(p-JNK)、增殖细胞核抗原(PCNA)、磷酸化丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶B(p-akt)及核因子-kappa B p65(NF-κB p65)蛋白水平。结果与对照组比较,CCl4组小鼠肝脏ALT明显升高。与CCl4组比较,不同时点的PBA+CCl4组小鼠肝脏ALT水平有不同程度地降低,其中24 h时点最明显[ALT:(7 423.81±581.75)U/L与(2 876.19±179.76)U/L;t=14.984,P0.01],而小鼠肝重体重比仅在48 h时点存在明显差异[(0.072±0.001)与(0.064±0.004);t=3.915,P0.01];病理学及TUNEL技术检测凋亡结果显示:在24 h时点肝细胞凋亡最明显;PBA处理可减轻CCl4引起的肝细胞坏死及凋亡程度;Western blot结果显示PBA处理可降低肝脏内质网应激相关蛋白分子(GRP78、p-e IF2α、CHOP、p-JNK)水平(P0.01)。进一步研究发现,CCl4处理后48 h及72 h时点肝细胞增殖明显,肝细胞增殖相关的p-akt、PCNA及NF-κB p65蛋白水平明显升高,与CCl4组相比,PBA+CCl4组与肝细胞增殖相关的p-akt、PCNA及NF-κB p65蛋白水平明显降低(P0.01);免疫组化方法检测PCNA结果显示,与CCl4组相比,在48 h及72 h时点,PBA+CCl4组肝细胞增殖有所减弱。结论CCl4可通过内质网应激诱导小鼠急性肝损伤,内质网应激抑制剂PBA可减轻肝细胞损伤和凋亡的程度并抑制肝细胞增殖的速度,表明内质网应激参与急性肝损伤与修复的过程,并在CCl4致急性肝损伤中可能发挥重要作用。
【关键词】：四氯化碳 4-苯基丁酸 内质网应激 凋亡 增殖 急性肝损伤
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R575
【目录】：

• 英文缩略词6-7
• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-11
• 1. 前言11-13
• 2. 材料和方法13-18
• 2.1 实验材料13-15
• 2.2 实验方法15-18
• 3. 结果18-33
• 3.1 PBA对CCl4引起小鼠急性肝损伤的影响18-23
• 3.1.1 各组小鼠肝重、肝脏系数和ALT的变化18-21
• 3.1.2 HE染色观察各组小鼠组织病理学变化21-23
• 3.2 PBA对CCl4引起小鼠肝细胞凋亡的影响23-24
• 3.3 PBA对CCl4引起急性肝损伤后肝细胞增殖的影响24-29
• 3.3.1 免疫组化方法检测各组小鼠肝细胞增值变化24-26
• 3.3.2 各组小鼠肝细胞PCNA蛋白水平的变化26-27
• 3.3.3 各组小鼠肝细胞p-akt蛋白水平的变化27-28
• 3.3.4 各组小鼠肝细胞核NF-κB p65蛋白水平的变化28-29
• 3.4 各组小鼠肝细胞中ERS标志蛋白水平的变化29-33
• 3.4.1 各组小鼠肝细胞中GRP78蛋白水平的变化29-30
• 3.4.2 各组小鼠肝细胞中p-eIF2α 蛋白水平的变化30-31
• 3.4.3 各组小鼠肝细胞中p-JNK蛋白水平的变化31-32
• 3.4.4 各组小鼠肝细胞中CHOP蛋白水平的变化32-33
• 4. 讨论33-38
• 5. 结论38-39
• 6. 参考文献39-46
• 附录46-47
• 致谢47-48
• 综述48-58
• 参考文献54-58

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  本文关键词：4-苯基丁酸对四氯化碳诱导小鼠急性肝损伤的影响，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：260458