TRPM7对PDGF诱导的HSC-T6增殖的调控机制研究

发布时间：2020-03-31 11:23

【摘要】：肝纤维化是肝脏对不同病因所致的慢性损害产生的创伤愈合反应，以细胞外基质(extracellular matrix，ECM)成分的过度增生与异常沉积为主要特征，是多种慢性肝病向肝硬化发展的中间病理阶段。肝纤维化可发展为肝硬化、甚至肝癌。但肝纤维化的发病机制还不明确。因此，深入了解肝纤维化分子作用机制，寻找新的抗纤维化药物具有重要的理论和实际意义。肝星状细胞(hepatic stellate cell，HSC)的活化和增殖是肝纤维化发生发展的中心环节。研究发现多条离子通道蛋白可通过改变HSC中离子的变化，调控HSC的增殖活化。瞬时受体电位通道是位于细胞膜上的一类重要的阳离子通道蛋白，瞬时受体电位通道7(TRPM7)为TRP家族成员之一，是具有阳离子通道和蛋白激酶双重结构的双功能膜蛋白，可使自身或底物磷酸化，也被称为“通道酶”。文献报道，TRPM7参与细胞的生长、增殖等多种生理过程。本课题通过体外建立肝纤维化细胞模型，了解TRPM7在大鼠肝纤维化进程中的作用，并通过检测肝星状细胞中PI3K/AKT信号转导通路中关键信号传导分子PI3K、AKT等表达水平的变化，探讨TRPM7在肝纤维化进程中对HSC增殖调控的分子机制。 1. TRPM7与肝星状细胞HSC-T6增殖之间的关系建立体外PDGF诱导的HSC-T6模型，再分别给予PI3K/AKT通路特异性阻断剂LY294002、离子通道阻断剂2-APB、Gd~(3+)处理，结果显示：PDGF明显促进HSC的活化增殖，而给予LY294002、2-APB、Gd~(3+)干预后，HSC的增殖明显受到抑制。 2.脂质体转染TRPM7siRNA对肝星状细胞系HSC-T6细胞增殖的影响建立体外TRPM7基因沉默模型，观察TRPM7siRNA对HSC增殖的影响。实验结果显示：转染TRPM7-siRNA48h后，，细胞增长明显减慢，在一定范围内抑制率呈浓度依赖性；随着TRPM7表达的降低，α-SMA、Collagen的mRNA表达亦明显降低，表明沉默TRPM7可抑制HSC的活化增殖。进一步研究TRPM7对HSC-T6细胞周期的影响，结果发现，沉默TRPM7可通过促使细胞聚积于G_0/G_1期，降低G2/M期及S期细胞，影响HSC-T6细胞的增殖。以上结果提示：TRPM7参与了HSC的增殖与活化，抑制TRPM7的表达可明显抑制HSC的活化增殖。 3. TRPM7对肝星状细胞PI3K/AKT信号通路的影响建立体外PDGF诱导的HSC-T6模型，再分别给予PI3K/AKT通路特异性阻断剂LY294002、离子通道阻断剂2-APB、Gd~(3+)处理，与正常组比较，PDGF能明显促进HSC-T6TRPM7、α-SMA、Collagen mRNA和p-PI3K和p-AKT蛋白的表达，当使用LY294002、2-APB、Gd~(3+)处理后，TRPM7、α-SMA、Collagen mRNA和TRPM7、p-PI3K和p-AKT蛋白表达均受到抑制，T-PI3K、T-AKT表达无明显变化。以上结果均表明：TRPM7表达降低可以有效改善肝功能，减轻肝组织病理损伤程度，对肝纤维化具有一定的保护作用，其机制可能与调控PI3K/AKT信号通路有关。
【图文】：

纤维化,肝组织,模型

4诱导的纤维化肝组织及PDGF诱导的体外HSC-T6模型中TRPM7mRNA的表达均明显高于正常组(P<0.01)，见图1。M 1 2100250500100250500750**P <0.01 vs Normalβ-actin350bpTRPM7621bp00.10.20.30.40.50.61 2RPM7T/βactin-**图1 肝脏组织中TRPM7mRNA的表达M: Marker 1: 正常组 2: CCL4模型组Fig1 TRPM7 mRNA expression in liverM: Marker 1: normal group 2: model group induced by CCL4

细胞增殖,抑制率,浓度

别浓度(μmol/L) 吸光度值抑制率(%)照 - 0.52±0.04 -型 - 0.84±0.02 -58.5△△Y294002 25 0.75±0.05 10.5*50 0.62±0.04 26.2**100 0.59±0.05 29.8**APB 50 0.74±0.05 11.9*100 0.61±0.02 27.4**200 0.58±0.07 30.9**3+1025500.76±0.050.63±0.040.60±0.069.5*25.1**28.6**
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R575.2

【参考文献】