HBV慢性感染者血清抗-HBx与细胞因子相关性研究

发布时间：2020-04-01 01:40

【摘要】：研究背景及目的：据世界卫生组织统计,全球约20亿人感染过乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV),其中有3.5亿人为HBV慢性感染者,每年约有100万人死于HBV慢性感染所致的肝衰竭、肝炎后肝硬化和原发性肝细胞癌。世界不同地区HBV感染的流行强度差异很大,我国已经从高流行区降低为中度流行区。2006年全国流行病学调查表明,我国1-59岁一般人群居民的乙肝表面抗原阳性率约7.18%[2],5岁以下儿童的乙肝表面抗原阳性率仅为1%[3-41。据此推算,我国现有的慢性HBV感染者约9300万,其中慢性乙型肝炎患者约2000万例。HBV慢性感染严重威胁着我国人民的健康。 HBV感染后,机体大部分呈现出亚临床感染过程,一部分表现为急性病毒性肝炎,病毒很快被清除,极小部分发展成重肝,另有小部分转变为慢性肝炎,反复发病,持续多年,其中有些最终形成肝炎后肝硬化或原发性肝细胞癌。造成HBV慢性感染者疾病不同转归的机制尚不明确。研究表明,乙肝病毒x蛋白(HBx)是HBV基因组所编码蛋白质中唯一具有多种调控功能的病毒蛋白质,这些调控作用决定了HBVX基因及表达产物HBx在HBV感染免疫机制中的复杂功能。HBx具有复杂的生物学活性,对多种基因具有反式激活作用,与病毒基因整合和宿主细胞的基因突变密切相关。HBx可通过多种调控作用直接或者间接地对病毒的复制与增殖以及宿主细胞的凋亡、癌变等过程产生广泛的影响。HBVX基因编码蛋白HBx包含6个区(A～F),共154个氨基酸(amino acid, aa)。HBx调控功能主要包括：激活宿主细胞和病毒自身基因的转录、调控细胞凋亡、抑制细胞中受损DNA的外切修复反应、增强原癌基因的转录活性、激活人端粒酶反转录酶、激活细胞中信号转导通路和促进肝纤维化等。HBx通过多种调控作用直接或间接地对病毒自身的复制、宿主细胞中基因的表达、细胞的凋亡与癌变等过程产生广泛的影响。HBx即乙型肝炎病毒X抗原(HBxAg)在肝癌组织细胞中呈高表达状态。HBxAg反式激活肝细胞原癌基因异常活化、促使肝细胞发生癌变。HBV X基因及其表达产物HBx成为近年来国内外的研究热点。虽然大部分HBV在肝细胞中复制,但是病毒也会侵犯宿主免疫系统,激活免疫细胞,产生炎症及抗体,HBxAg刺激机体产生的抗体(HBxAb)即抗-HBx。Park EH等报道在慢性HBV感染者、肝硬化、肝细胞癌患者肝脏组织中能够检测到HBxAg。 Horiike N等发现HBxAg在慢性乙型病毒性肝炎患者肝脏组织中普遍存在,与丙氨酸氨基转移酶有明显的相关性而与HBV复制的血清标志物没有关联。Huang Y等研究发现,在慢性活动性肝炎患者血清中,HBxAg量与HBeAg的含量相似；在血清HBeAg HBVDNA且肝组织HBcAg阳性的患者中,HBxAg的阳性率较高。检测HBV X基因的表达也许会有利于对慢性乙型病毒性肝炎及其导致的肝硬化和肝癌的早期诊断和预后判断。而机体针对HBxAg产生的抗体(抗-HBx)有学者认为是一个普遍的、乙型病毒性肝炎感染的早期标志物,在急性乙型病毒性肝炎中短暂的出现,在慢性乙型病毒性肝炎中持续的存在,抗-HBx的量与乙型肝炎病毒复制的持续性和强度有关联,而与肝脏疾病的严重性及恶性进展没有关联。Moriarty等发现抗-HBx与HBV相关性肝细胞癌密切相关,可以作为肝细胞癌癌前标志物。血清中抗-HBx是HBV复制的标志,尤其是由乙型肝炎病毒导致的肝炎后肝硬化及原发性肝细胞癌的标志物,而不是一种保护性抗体。有学者应用鼠抗-HBxAg的单克隆作为载体携带碘131靶向治疗2例肝细胞肝癌患者,2例患者的AFP显著降低,症状得到明显改善[13]。Kim JW等认为,在乙型肝炎病毒感染的慢性过程中,HBxAg/抗-HBx的存在与标志病毒持续复制的血清学标志有关联。近几年,关于乙肝病毒X基因与肝细胞癌关系的研究较多,慢性HBV感染过程中宿主的免疫状态及各种细胞因子的检测亦是人们研究的热点。但是,乙肝病毒X基因表达产物HBxAg刺激机体产生的抗-HBx的意义、及其与宿主各种细胞因子的关系怎样尚未见详细研究报道。本文拟通过对HBV慢性感染者免疫耐受期(即无症状携带者,ASC)、免疫清除期(即慢性乙型肝炎,CHB)、乙肝肝硬化(LC)和乙肝相关性肝细胞癌(HCC)共90例患者血清中抗-HBx、Fas(可溶性Fas,sFas)、IL-10、IL-12等的检测和比较,探讨抗-HBx出现的意义和与其他免疫指标的相互关系。阐明抗-HBx变化与HBV慢性感染预后的关系,丰富乙型肝炎致病理论,为寻找抗HBV治疗新的靶点、时机和策略提供依据。方法：随机选择90例山东籍HBV慢性感染者,即无症状携带者10例、慢性乙型肝炎28例、乙肝肝硬化26例和乙肝相关性肝细胞癌26例。所有患者均空腹抽血,制备血清。应用全自动生化分析仪测定谷丙转氨酶(ALT)、胆红素(TBIL)等肝功能指标,采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验法测定IL-10、IL-12和Fas,采用我们建立的ELISA方法检测患者血清中抗-HBx。结果： 1.从无症状慢性HBV携带者到慢性乙型肝炎(慢乙肝)、乙肝肝硬化和乙肝相关性肝细胞癌患者外周血IL-10、IL-12和Fas水平均呈现逐渐增高的趋势。4组患者检测的结果IL-10分别是13.93±14.40ng/L,39.38±20.77ng/L,69.06±46.37ng/L和62.82±23.42ng/L；IL-12分别是15.64±23.04ng/L,68.50±23.14ng/L,76.83±12.82ng/L和83.74±24.88ng/L；Fas分别是58.17±77.42ng/L,179.88±104.36ng/L,249.22±107.80ng/L和252.98±87.65ng/L。以上3项指标在无症状携带者与其他3组之间均有显著性差异(P0.001)；肝硬化和肝癌组也分别高于慢乙肝组,其中IL-10、Fas水平差异显著(P0.05),IL-12水平在慢乙肝组与肝硬化组间无统计学意义(P=0.154),慢乙肝组与肝癌组差异显著(P=0.01)。肝硬化组和肝癌组相比, IL-12、Fas以肝癌组略高,IL-10以肝硬化组稍高,但差异无显著性(P0.05)。 2.90例病人中抗-HBx阳性27例,其中携带者(ASC)1例,慢乙肝(CHB)4例、肝硬化(LC)12例、肝细胞癌患者(HCC)10例,其阳性比例分别为10%、14.28%、46.15%和38.46%。 3.根据抗-HBx定性结果将病人分为抗-HBx阴性和抗HBx阳性2组。抗-HBx阳性组病人其IL-10、IL-12、Fas三项细胞因子水平均高于阴性组,其中阴性组测得以上三项结果分别为194.21±111.64ng/L,45.98±29.54ng/L,64.81±27.57ng/L,阳性组病人结果分别为238.25±118.33ng/L,65.73±43.42ng/L,80.23±29.69ng/L,IL-10、IL-12在2组间差异显著(P均0.05),Fas结果在2组间无统计学意义(P=0.094)。结论： 1.从HBV慢性携带者到慢乙肝、乙肝肝硬化和乙肝相关性肝细胞癌患者的外周血IL-10、IL-12水平均呈现逐渐增高的趋势,但以IL-10增高明显,IL-12分泌相对不足,提示IL-10水平升高与疾病进展密切相关。 2.血清Fas水平在肝硬化、肝癌的发展过程中可能起着非常重要的作用,血清Fas的测定可以作为慢性乙型肝炎患者肝组织损伤程度的评价指标之一。 3.血清中抗-HBx并非保护性抗体,抗-HBx阳性病人IL-10、IL-12、Fas三项细胞因子水平均高于阴性组,与其疾病进展程度一致。抗-HBx可能成为从慢性乙肝向肝硬化或肝癌发展的又一血清标志物。
【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R512.62

【参考文献】