阿德福韦酯治疗慢性乙肝患者的病毒动力学研究

发布时间：2020-04-01 01:47

【摘要】： 目的 1.研究阿德福韦酯治疗慢性乙型肝炎患者病毒动力学改变。2.研究抗病毒治疗过程中两个时相转变时期外周血和肝脏局部HBV DNA和cccDNA的表达。 方法 通过建立实时荧光定量PCR体系检测cccDNA (covalently closed circular DNA, cccDNA)。采用不同浓度质粒标准品建立实时荧光定量PCR标准曲线,采用跨缺口的引物及PSAD酶消化样品中混杂的rcDNA及线状双链DNA,以提高PCR技术检测cccDNA的特异性,同时验证该方法的重复性和灵敏性。以13例慢性乙肝患者为研究对象,应用实时荧光定量PCR检测治疗前(13例)和治疗后12周(7例)肝组织及血清中HBV DNA和HBV cccDNA,联合检测外周血病毒、生化指标以研究抗病毒治疗过程中肝内及外周血的病毒动力学改变。 结果 建立cccDNA的实时荧光定量PCR检测方法,线性范围为102-108copies/ml。患者肝组织中均可检测到cccDNA,血清中cccDNA的阳性率为35.5%。肝脏HBVDNA表达与外周HBV DNA (r=0.823, P0.001)、HBsAg (r=0.623, P=0.002)、HBeAg (r=0.507, P=0.023)正相关,cccDNA表达与外周血HBV DNA(r=0.499, P=0.025)、HBsAg (r=0.546, P=0.013)正相关,与HBeAg无相关性,治疗12周时肝内HBV DNA和cccDNA较治疗前分别下降了95.17%和96.63%,与外周血HBV DNA(99.6%)一致。 结论 1.建立实时荧光定量PCR检测cccDNA (covalently closed circular DNA, cccDNA)体系。 2.肝脏HBV DNA表达与外周血HBV DNA、HBsAg、HBeAg正相关,肝脏cccDNA表达与外周血HBV DNA、HBsAg正相关。 3.阿德福韦酯治疗慢性乙肝患者,在治疗后12周内肝脏HBV DNA及cccDNA快速下降,在病毒动力学的快速下降期有95.17%和96.63%的病毒被清除,肝脏局部早期的病毒清除动力学与外周病毒清除动力学一致。
【图文】：

图3质粒酶切后电泳图像乙醇纯化质粒，以回收的质粒作为标准品。该序鉴定过，实验过程中采用乙肝基因不同部位的的条带，，测序结果亦证实其碱基序列与目的基因因。按前述公式梯度稀释后，分别以.cccDNAM12345678NTCZ000bPI000bP75ObPSOObP250bPIOObP

图3质粒酶切后电泳图像收后乙醇纯化质粒，以回收的质粒作为标准品。该质测序鉴定过，实验过程中采用乙肝基因不同部位的致的条带，测序结果亦证实其碱基序列与目的基因长基因。按前述公式梯度稀释后，分别以.cccDNAM12345678NTC
【学位授予单位】：福建医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R512.62

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本文编号：2609849