缺氧在胆管结扎大鼠胆汁性肝纤维化形成中的作用机制

发布时间：2020-04-03 22:53

【摘要】： 肝纤维化的发病机制极为复杂,是一个由多因素多环节,涉及细胞、细胞因子、细胞外基质共同作用的结果。肝脏是机体最重要的代谢器官,因其血供系统的特殊性,从门静脉和肝动脉到中央静脉形成明显的氧分压梯度,所以肝脏容易遭受缺氧。各种原因引起的肝损伤都是造成肝脏缺氧的重要因素,缺氧激活肝星状细胞从而启动肝纤维化形成,可能是各种病因致肝纤维化的共同机制,因此探讨缺氧在肝纤维化形成中的作用机制,对于了解肝纤维化形成机制有重要的意义。目的探讨缺氧在大鼠胆汁性肝纤维化形成中的作用机制。方法 1.利用胆管结扎(bile duct ligation,BDL)建立大鼠胆汁性肝纤维化模型,于术后1d、3d、7d、14d、21d、28d杀鼠取材,观察组织学和超微结构改变;逆转录PCR法检测转化生长因子β1(TGF-β1)、I型胶原mRNA的表达;蛋白免疫印迹检测缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle,α-SMA)的表达。 2.缺氧培养大鼠肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)株HSC-T6,逆转录PCR检测HIF-1α、TGF-β1、I型胶原mRNA的表达,蛋白免疫印迹检测α-SMA表达。缺氧/常氧下,加2μg/mL TGF-β1中和抗体、50μmol/L HIF-1α诱导剂氯化钴(cobalt chloride, CoCl2)或HIF-1α抑制剂2-甲氧雌二醇(2ME2),逆转录PCR检测HSC-T6表达I型胶原mRNA的变化。结果 1.电镜结果显示胆管结扎后早期肝细胞便出现缺氧、能量代谢障碍表现;胆管结扎3d时,HIF-1α表达明显升高,于胆管结扎7d时,α-SMA蛋白、TGF-β1、I型胶原mRNA表达明显升高。 2.缺氧能诱导HSC-T6表达HIF-1α、TGF-β1、I型胶原mRNA及α-SMA蛋白;常氧下CoCl2能诱导HSC-T6表达I型胶原mRNA,TGF-β1中和抗体及2ME2能减弱缺氧诱导HSC-T6表达I型胶原mRNA; 结论缺氧激活肝星状细胞,分泌I型胶原,增加细胞外基质沉积,其作用机制既依赖于TGF-β1的胞内信号传导机制,也与HIF-α介导的信号传导有关,在大鼠胆汁淤积性肝纤维化形成中起着重要的作用。
【图文】：

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肝细胞呈双核，线粒体肿胀明显，嵴断裂甚至空泡变，滑面内质网增生，溶酶体增多，可见胆汁栓形成；狄氏间隙内库普弗细胞数量明显增多，体积增大，吞噬胆汁栓，可见中性粒细胞浸润，尚未见胶原沉积。BDL-7d 组上述肝脏缺氧、能量代谢障碍、胆汁淤积等表现明显加重；狄氏间隙内可见肝星状细胞明显增多，胞内脂滴减少，周围有胶原沉积。具体电镜下改变见图 2-7。2.6 肝组织 HIF-1α 蛋白表达的变化胆管结扎 3d 时，肝组织 HIF-1α 蛋白表达量（0.91±0.13）便显著高于Sham 组（0.41±0.22）（P＜0.05），且随着结扎时间的延长，HIF-1α 蛋白表达量逐渐升高。在胆管结扎 1d 时，HIF-1α 蛋白表达量稍有升高，但与 Sham组未见明显差异（P＞0.05），如图 8 。相关分析显示，HIF-1α 蛋白表达量与肝纤维化积分呈显著正相关（r=0.875，P＜0.05）

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第四军医大学硕士学位论文Fig.8. Activation of HIF-1αin the livers of bile duct-ligated rats. Proteinexpression was measured by Western blot at different time points of treatmentand quantitated by densitometry. n = 3 experiments.2.7 肝组织 α-SMA 蛋白的变化胆管结扎 7d 时，肝组织 α-SMA 蛋白表达量（0.69±0.21）就显著高于 Sham组（0.37±0.21）（P＜0.05），且随着结扎时间的延长，α-SMA 蛋白表达量逐渐升高。胆管结扎 1d 和 3d 时，α-SMA 蛋白表达量稍有升高，但均与 Sham组未见明显差异（P＞0.05），如图 9
【学位授予单位】：第四军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R575.2

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