普罗布考治疗大鼠慢性胰腺炎的实验研究

发布时间：2020-04-16 18:07

【摘要】： 目的:本实验研究通过建立大鼠慢性胰腺炎模型,探讨使用抗氧化剂普罗布考对大鼠慢性胰腺炎的治疗作用及其作用机制。方法: 第一部分采用腹腔内注射10%的二乙基二硫代氨基甲酸盐(diethyldithiocarbam- ate,DDC)500mg/kg制造大鼠慢性胰腺炎模型。将48只雄性SD大鼠称重、编号,应用随机数字表将其随机分为模型组和对照组2组,每组24只大鼠。对模型组大鼠,每周2次腹腔内注射10%的DDC500mg/kg,对照组大鼠则每周2次腹腔内注射生理盐水0.5ml/kg。从术后24小时开始,分别于手术后24小时、48小时、1周、2周、3周、4周称量体重后处死模型组和对照组的各4只大鼠,测定血清及胰腺组织中的超氧歧化酶( superoxide dismutase,SOD )、丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量; HE染色病理切片观察胰腺纤维化的程度;免疫组织化学检测胰腺组织中α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、胶原蛋白Ⅰ(CollagenⅠ,CO-Ⅰ)和转化生长因子β(1transforming growth factorbeta-1,TGF-β_1)表达情况。第二部分模型制造成功后取50只雄性SD大鼠,体重220~240g,随机分为5组,每组10只:对照组(A组)、模型组(B组)、普罗布考治疗组(C、D、E组)。普罗布考治疗分为3个剂量组:分别为75mg/ kg(普低组,C组)、150mg/ kg(普中组,D组)、300mg/ kg(普高组,E组)连续喂养4周;而对照组和模型组则予以同体积的0.9%生理盐水喂养。喂养4周后称量体重后处死大鼠取标本测定血清及胰腺组织中的超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量;HE染色病理切片观察胰腺纤维化的程度;免疫组织化学检测胰腺组织中转化生长因子β_1(TGF-β_1)表达情况。结果(一): 1.体重的观察:实验的前1周,对照组和模型组大鼠体重都有增长,对照组增长稍快,模型组增长缓慢,但是两组间无显著性差异(P0.05);1周后,对照组大鼠体重继续增长,但是,模型组大鼠体重不增反降,两组间体重有显著性差异(P0.01)。 2.α-SMA、CO-Ⅰ、TGFβ_1的表达:对照组胰腺组织α-SMA、CO-Ⅰ、TGFβ_1未见明显表达,几乎无纤维化迹象;各模型组之间的比较仅24小时与48小时比较P0.05,两组之间无统计学差异;余下各组之间比较均有显著性差异,且随着时间的延长,α-SMA、CO-Ⅰ、TGFβ_1表达明显增多、大鼠胰腺纤维化的程度加重,排序顺序依次为24小时48小时1周2周3周4周。 3.血清和胰腺组织中的SOD、MDA:对照组血清和胰腺组织中的SOD、MDA值在整个实验过程中无明显变化,而模型组血清和胰腺组织SOD值在各时间点较对照组显著降低,相应的MDA值较对照组显著升高。结论(一): 1.每周2次腹腔内注射10%的DDC500mg/kg能够制造稳定的大鼠慢性胰腺炎模型,成模时间在4周时即较为典型。 2.胰腺炎中TGF-β_1表达、胰腺纤维化与氧化损伤有关,氧化应激参与了慢性胰腺炎的发病过程。结果(二) 1.体重的观察:模型组大鼠则食欲欠佳,到后期更是萎靡不振。只进食很少量的饲料,体重下降,毛发无光泽,有的大鼠有尿失禁、腹泻等现象。而普罗布考处理组的大鼠体重较模型组增加,差异有显著性(P0.01)。 2. TGF-β_1表达:与模型组相比普罗布考组胰腺组织中TGF-β_1的表达量下降,胰腺组织中的胶原纤维的表达量亦显著减少,胰腺纤维化的程度明显改善。 3.血清和胰腺组织中的MDA:与模型组相比普罗布考治疗组血清和胰腺组织中的MDA较模型组低,差异有显著性(P0.01),随着普罗布考治疗剂量的增加,血清和胰腺组织中的MDA含量逐渐下降,其MDA含量排序依次为模型组(B组)普低组(C组)普中组(D组)普高组(E组)对照组(A组)。 4.血清和胰腺组织中的SOD:与模型组相比普罗布考各治疗组血清和胰腺组织中的SOD较模型组高,差异有显著性(P0.01),随着普罗布考治疗剂量的增加,血清和胰腺组织中的SOD含量逐渐升高,其SOD含量排序依次为模型组(B组)普低组(C组)普中组(D组)普高组(E组)对照组(A组)。 5.各组胰腺组织表达TGF-β_1和血清MDA呈明显正相关,相关系数r分别为:模型组(B组)=0.860,P 0.01;普低组(C组)=0.791,P 0.05;普中组(D组)=0.836,P 0.05;普高组(E组)=0.861,P 0.01。 6.除普低组(C组)外其余各组胰腺组织表达TGF-β_1和胰腺组织MDA呈明显正相关,相关系数r分别为:模型组(B组)=0.718,P 0.05;普低组(C组)=0.689,P 0.05;普中组(D组)=0.861,P 0.01;普高组(E组)=0.750,P 0.05。 7.各组胰腺组织表达TGFβ_1表达和血清SOD呈明显负相关,相关系数r分别为:模型组(B组)=-0.804,P 0.05;普低组(C组)=-0.819,P 0.05;普中组(D组)=-0.805,P 0.05;普高组(E组)=-0.837,P 0.01。 8.除普低组(C组)外其余各组胰腺组织表达TGFβ_1表达和胰腺SOD呈明显负相关,相关系数r分别为:模型组(B组)=-0.737,P 0.05;普低组(C组)=-0.687,P 0.05;普中组(D组)=-0.781,P 0.05;普高组(E组)=-0.846,P 0.01。结论(二) 普罗布考显著提高了机体的抗氧化能力,降低了TGF-β_1的表达,减少了胰腺组织中的纤维含量,对大鼠慢性胰腺炎模型具有抗纤维化作用。
【图文】：

血清MDA,相关系数,普高

图1-13：各组胰腺组织表达TGFβ1表达与血清MDA的关系①模型组：TGFβ1表达与血清MDA呈正相关关系，，相关系数为：0.860，P < 0.01。②普低组：TGFβ1表达与血清MDA呈正相关关系，相关系数为：0.791，P < 0.05。③普中组：TGFβ1表达与血清MDA呈正相关关系，相关系数为：0.836，P < 0.05。④普高组：TGFβ1表达与血清MDA呈正相关关系，相关系数为：0.861，P < 0.01。