Toll样受体通路介导褪黑素调节幽门螺杆菌感染所致胃炎

发布时间：2020-04-17 05:22

【摘要】：目的幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)所致感染是引起慢性胃炎、胃溃疡和胃癌等多种胃疾病的主要原因。目前,临床上对感染Hp出现症状的患者,主要通过三联疗法根除治疗。然而,近年来随着抗生素耐药状况日益严重以及质子泵抑制剂带来的副作用,传统的根除疗法已不能达到有效根除Hp的目的。因此,明确Hp致病机制,寻找有效的治疗方法,是目前临床上面临的重要问题。本课题以建立Hp感染所致小鼠胃炎为动物模型,用不同剂量褪黑素干预,研究褪黑素对Hp致胃炎过程中的免疫调节机制,以期为深化对Hp感染后引起的免疫应答机制及对神经-内分泌-免疫网络调节机制的认识提供一定的理论依据,为潜在的临床应用提供新的思路。方法本研究建立Hp感染小鼠胃疾病模型,用Hp连续灌胃后间隔两周,以不同浓度褪黑素干预,设褪黑素拮抗剂干预组,分别于褪黑素用药后2周、4周、6周取材:1.运用石蜡切片HE染色方法检测小鼠胃黏膜组织病理变化。2.免疫组织化学方法检测小鼠胃TLR2、TLR4和脾Foxp3表达量变化。3.流式液相多重蛋白定量技术(CBA)检测各组小鼠血清免疫炎症因子IL-2、IL-6、IL-10、IL-17A、IFN-γ、TNF-α等含量的变化。4.Western Blot方法检测小鼠胃TLR2、MyD88、p65、p50、p-ERK、p-p38蛋白表达的变化。结果1.HE染色结果显示,在小鼠胃黏膜及黏膜下层,有明显散在分布的炎症细胞,且以中性粒细胞居多,表明Hp感染致小鼠胃炎模型构建成功。2.免疫组织化学结果显示,小鼠胃黏膜层TLR2表达在Hp感染后明显上调,褪黑素干预后明显下调,褪黑素拮抗剂组明显上升;TLR4表达在各组间无明显变化;脾中Foxp3表达在Hp感染后上调,褪黑素干预后表达下调,拮抗剂组较未加拮抗剂组无明显变化。3.CBA检测结果显示,小鼠血清IL-2、IL-6、IL-10、IL-17A、IFN-γ、TNF-α等各细胞因子在褪黑素干预2、6周后,较仅Hp感染组显著下调,拮抗剂组各细胞因子大量增多,褪黑素干预4周后各组间变化不明显。4.Western Blot检测结果显示,小鼠胃TLR2、MyD88、p-ERK、p-p38在褪黑素干预2周后较仅Hp感染组明显下调,褪黑素干预4、6周后表达无明显变化;p65、p50在褪黑素干预2周后表达略微下调,而4、6周后变化不明显。结论褪黑素调节Hp感染所致小鼠胃炎的机制可能包括褪黑素下调胃黏膜TLR2表达、抑制血浆各炎症细胞因子表达、调节脾中调节性T细胞关键转录因子Foxp3表达等。
【图文】：

小鼠,放大倍数,HE染色,褪黑素

A B图 1 H.pylori 感染小鼠胃组织 HE 染色，图 A、B 放大倍数分别为×200，×400Fig 1 The stomach tissue of H.pylori-infected mouse HE staining. The magnification of figure A、B is ×200、×400疫组织化学检测褪黑素对 Hp 感染小鼠胃组织 TLR2、TLR Foxp3 表达影响小鼠胃组织 TLR2、TLR4 表达为研究褪黑素及其拮抗剂 Luzindole 在 H.pylori 感染致胃炎天然免疫反应中样受体(TLRs)的作用，运用免疫组织化学染色方法检测小鼠胃组织 TLR2 和4 的表达情况。结果如图 2-9 所示，在 Hp 感染 2、4 周时，胃黏膜上皮 TLR明显上调，差异有统计学意义（P<0.01），而 6 周时空白对照组(Hp 感染未褪黑素，即 0 组)较正常对照组（无 Hp 感染，即 N 组）变化不明显；褪黑素

免疫组化染色,小鼠,褪黑素,统计学意义

TLR2 明显回调，达到空白对照组水平，同时在拮抗剂加 50mg/kg 褪黑素(即 50L组)时较空白对照组及 L 组明显下调，差异有统计学意义（P<0.05）；在褪黑素干预 6 周时，TLR2 表达略微上调，较空白对照组变化不明显，差异无统计学意义（P>0.05）。在 2 周时，胃黏膜 TLR4 表达，，无论在空白对照组还是感染 Hp 加褪黑素以及拮抗剂组干预后表达均无明显变化；在 4 周时，空白对照组与正常对照组比表达上调，差异有统计学意义（P<0.01），褪黑素 25mg/kg、50mg/kg 干预后，TLR4表达下调，差异无统计学意义；6 周时，空白对照组 TLR4 表达略有下调，与正常对照组比差异不明显，而褪黑素干预 50mg/kg 组 TLR4 表达较正常对照组及空白对照组明显上调，差异有统计学意义（P<0.01）。
【学位授予单位】：福建医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R573.3

【参考文献】