人—人嵌合型抗甲型肝炎病毒IgM抗体检测质控物研究

发布时间：2020-04-25 12:49

【摘要】： 目的本研究拟用化学交联方法构建一种人-人抗体嵌合物作为抗-甲型肝炎病毒(hepatitis A virus,HAV)IgM抗体检测质控品,并探讨其在临床应用价值。方法一、嵌合抗体的构建通过酶联免疫吸附试验筛选出抗-HAV IgG阳性效价高的血清(抗HIV-1、HBsAg阴性,抗-HEV、抗-HCV、梅毒抗体阴性),再以蛋白A柱纯化出含高滴度抗-HAV IgG的人总IgG,以分子筛色谱纯化出健康人IgM抗体。选择1-乙基-3[3-二甲基氨基丙基]碳二亚胺作为化学交联剂将两者交联,得到的嵌合人-人IgG、IgM抗体既能和甲型肝炎病毒抗原(Hepatitis A Virus Antigen,HAV-Ag)特异性结合,又能与检测体系中的抗μ链抗体特异结合。根据嵌合抗体的抗-HAVIgM活性来确定交联反应的最佳反应条件,并对该嵌合抗体的干扰反应、交叉反应进行研究,同时以卫生部临床检验中心的抗-HAV IgM质控品作为对照研究该嵌合抗体的适用性。二、嵌合抗体作为质控物稳定性及通用性研究对本嵌合抗体的稳定性进行研究,对不同稀释保存液(包括BSA、组氨酸、山梨醇等添加剂组分及浓度)进行筛选,寻找使嵌合抗体稳定保存的条件。稳定性的保存条件:将上述1:1 000倍稀释后及未稀释的嵌合抗体质控物置于4℃、—20℃、室温、37℃、及—70℃/室温反复冻融3次的条件下保存不同时间观察其稳定性。分别采用万泰、新创及雅培商品试剂盒对本嵌合抗体进行检测,考察其通用性。结果一、嵌合抗体的构建本研究的最佳交联反应条件为IgG与IgM质量比5:1(5mg IgG/1mg IgM),每mg IgM反应体系中加入10mg交联剂,室温反应6～18h。交联后得到了稳定的嵌合抗体产物,且抗-HAV IgM检测滴度达到1:20 000。将该产物1:1 000倍稀释后,检测值仍与卫生部临床检验中心发放的抗-HAV IgM质控品相当,能够作为抗-HAV IgM检测的阳性质控。干扰实验结果表明,作为反应物的IgG、IgM及交联剂不影响嵌合抗体的阳性检测结果,且该嵌合抗体在抗-HBc IgM、抗-HEV IgM检测中不存在交叉反应。二、嵌合抗体质控物稳定性研究及通用性研究本嵌合抗体在4℃条件下能稳定保存至少3个月,经过稀释保存液即含1%BSA、10mmol/L组氨酸的PBS溶液1000倍稀释后,于4℃及-20℃条件下可以稳定保存至少4个月。本嵌合抗体采用以上3个厂家的商品试剂盒均能检出阳性结果,具有一定的通用性。结论通过化学交联的方法成功构建了人-人嵌合抗体作为抗-HAV IgM检测质控物。该质控品具有良好的稳定性和通用性。根据已经建立的方法,可以构建一系列用于其他病毒特异IgM抗体酶联免疫检测的质控品。
【学位授予单位】：中国协和医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2009
【分类号】：R512.61;R446.6

【参考文献】