粪便钙卫蛋白和中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白对于炎症性肠病患者疾病活动性监测作用的研究

发布时间：2020-04-25 17:44

【摘要】：目的:炎症性肠病(Inflammatory Bowel Disease,IBD)是一组可能与环境、遗传、感染、免疫等多种因素有关的慢性非特异性肠道炎症性疾病,目前我国IBD的发病率较前有明显升高趋势,该疾病存在活动期与缓解期交替出现的特点。主要依赖内镜检查来判断疾病的活动性,但内镜检查过程中患者痛苦大,尤其对肠道炎症较重的患者检查时存在较大的风险,较难在短期内反复检查,所以一种无创、能够反复检查且相对特异性的评估疾病活动性的指标越来越重要。因此多种粪便炎性标志物在IBD的活动性方面的研究越来越多,但是哪一种指标具有更好的作用并不十分肯定,为筛选更优异的指标,本实验选取了两种指标进行一定的研究。其中粪便钙卫蛋白(Fecal Calprotectin,FC)的研究比较多,作用也比较确切,但是并不能反映所有肠道的炎症水平,在此基础上,有人提出了一种比较新的、目前研究较少的粪便标志物中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(Neutrophil Gelatinase-associated Lipocalin,NGAL),研究其作为粪便炎症标志物的作用是否更优越,以及与FC是否具有一定的相关性,结合两者是否可以提高评价疾病活动性的作用,旨在筛选出可以在内镜检查前初步评价IBD活动性的指标,以减少不必要的侵入性检查。研究方法:按照严格的纳入标准和排除标准选取经内镜检查并结合病理证实的IBD患者54例,包括溃疡性结肠炎(Ulcerative Colitis,UC)患者35例和克罗恩病(Crohn's Disease,CD)患者19例,选择健康体检患者,内镜检查结果正常的人群纳入健康对照组共15例。在结肠镜检查之前,嘱患者留取粪便约5g,于-80℃冰箱冻存,采用ELISA方法检测FC和NGAL的浓度,并收集患者临床症状、内镜结果以及C反应蛋白(C Reactive Protein,CRP)及血沉(Erythrocyte Sedimentation Rate,ESR)等指标。首先研究FC及NGAL在疾病活动期、缓解期以及健康对照组粪便中的浓度,其次评价FC及NGAL与临床评分、内镜评分的相关性,再者评价其与CRP、ESR之间的相关性,最后研究其作为评价疾病活动性指标的敏感性与特异性以及二者联合检查的敏感性及特异性。结果:在UC患者中FC浓度活动期、缓解期及正常对照组分别为305.43±50.55pg/ml、254.49±36.40pg/ml及222.74±32.25pg/ml,活动期浓度明显高于缓解期及正常对照组,缓解期亦高于正常对照组;CD患者FC浓度活动期、缓解期级正常对照组分别为331.94±63.95pg/ml、225.41±19.23pg/ml及222.74±32.25pg/ml,活动期浓度明显高于缓解期及正常对照组,缓解期与正常对照组无明显差异。在UC患者中粪便NGAL浓度活动期、缓解期及正常对照组分别8.36±1.37ug/l、7.05±0.96ug/l及5.95±0.48ug/l,活动期粪便NGAL浓度高于缓解期浓度,缓解期粪便NGAL浓度亦高于正常对照组浓度;CD患者粪便NGAL浓度活动期、缓解期及对照组分别为8.86±1.16ug/l、7.40±1.22ug/l及5.95±0.48ug/l,活动期NGAL浓度高于缓解期浓度,缓解期NGAL浓度亦高于正常对照组浓度。UC患者FC的浓度与临床症状评分及内镜评分呈正相关(r=0.598 P=0.000;r=0.519 P=0.001);CD患者FC的浓度与临床症状评分呈正相关(r=0.716 P=0.001),与内镜评分的相关性不显著。UC及CD患者粪便NGAL浓度与临床及内镜评分相关性不显著(r=0.278P=0.105,r=0.314 P=0.066;r=0.248 P=0.305,r=0.357 P=0.133);且在UC及CD患者中FC与NGAL之间的相关性也不显著(r=0.153 P=0.380,r=0.307 P=0.201)。对于UC及CD患者,FC浓度与CRP及ESR在评估疾病活动性方面相关性不显著(r=0.277,P=0.108;r=0.315,P=0.074),对于UC及CD患者,NGAL浓度与CRP及ESR在评估疾病活动性方面相关性亦不显著(r=0.094,P=0.592;r=0.085,P=0.638)。在判断UC患者疾病的活动期与缓解期方面FC及NGAL的敏感性、特异性及二者联合检测检测的敏感性及特异性为(81.80%,87.50%;55.60%,87.50%;40.74%,100%);判断CD患者疾病的活动期与缓解期FC及NGAL的敏感性、特异性及二者联合检测检测的敏感性及特异性为(91.70%,85.70%;83.30%,71.40%;75%,85.70%),FC在判断IBD活动性方面的敏感性及特异性优于粪便NGAL,二者联合检测敏感性降低,特异性会提高。结论:1、FC浓度和NGAL浓度检测有助于判断IBD患者的疾病活动性;2、FC浓度与IBD患者的临床及内镜评分呈正相关,可以作为内镜检查前初筛疾病活动性的指标;3、FC在判断UC和CD疾病活动性的敏感性及特异性方面优于粪便NGAL;联合FC与NGAL两种指标可降低判断疾病活动的敏感性,但增强其特异性。
【图文】：

11、测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。 测定应在加终止液后 15 分钟以内进行。12、计算：以标准物的浓度为纵坐标，OD 值为横坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的 OD 值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与 OD 值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的 OD 值代入方程式，，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓。（2）NGAL 的 ELISA 的检测方法1、已提取的粪便上清液用于检测；2、将样本进行 1：5 倍稀释；余下步骤同上述 Cal 的 ELISA 检查方法2.2.6 粪便样本相关蛋白浓度的计算：（1）根据试剂盒标准品的钙卫蛋白浓度(pg/m1)和对应的 OD 值做曲线，如下图

中国医科大学硕士学位论文Y=-4.4739+192.9037X r=0.9986…………………………………………(1)将样本 OD 值带入上述标准曲线的函数式中，乘以校正稀释度(5)后得到样品中钙卫蛋白的浓度值(pg／ml)。（2）根据试剂盒标准品的 NGAL 浓度(μg/L)和对应的 OD 值做曲线，如下图
【学位授予单位】：中国医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R574

【参考文献】

相关期刊论文 前1条

1 ;炎症性肠病诊断与治疗的共识意见(2012年·广州)[J];胃肠病学;2012年12期

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1 韩玮;炎症性肠病临床调查及其与钙卫蛋白、乳铁蛋白表达的临床研究[D];安徽医科大学;2007年

本文编号：2640517