胎球蛋白A在急性肝衰竭中的保护作用研究

发布时间：2020-04-26 16:35

【摘要】： 目的：(1)探讨慢性重型肝炎患者的血清胎球蛋白A(fetuin—A)水平与肝损害程度、预后及肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor—α，TNF-α)的关系。(2)体外观察在脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)刺激下，胎球蛋白A对人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells，PBMC)分泌TNF-α和IL-6的影响。(3)建立一种简便、有效、稳定的暴发性肝衰竭(fulminant hepatic failure，FHF)动物模型，观察该模型动物不同时间点胎球蛋白A的表达情况；并用胎球蛋白A对FHF模型小鼠进行干预，观察胎球蛋白A对实验动物肝功能、肝脏组织学改变、肝细胞凋亡率和病死率的影响，并进一步探讨可能的机制。 方法：(1)设立健康对照组、慢性肝炎组和慢性重型肝炎组，慢重肝组中分设恢复组和未恢复组，检测血清胎球蛋白A、TNF—α、凝血酶原活动度、白蛋白和总胆红素。(2)常规分离培养人外周血单个核细胞，2％台盼蓝进行细胞活力检测后，分组观察胎球蛋白A干预对上清液中TNF-α和IL-6的表达量变化(ELISA法)。(3)采用析因试验法，以小鼠24 h病死率为评价指标，以实验鼠的血清肝功能和肝组织病理学改变为验证指标，建立规范化小鼠FHF模型。(4)利用RT-PCR、Western Blot和免疫组化技术，分别从mRNA水平和蛋白质水平研究FHF模型小鼠胎球蛋白A的表达变化。(5)分组观察胎球蛋白A的干预对模型小鼠的24h病死率、肝功能、肝组织病理改变(HE染色)、肝细胞凋亡率(原位末端标记法，TUNEL)改变和血清中TNF-α和IL-6的水平(ELISA法)的影响。 结果：(1)血清胎球蛋白A水平在慢性重型肝炎患者(114.02±89.11μg／ml)较健康对照者(317.75±107.83μg／ml)和慢性肝炎患者(253.14±206.45μg／ml)明显降低(P＜0.01)；在慢性重型肝炎患者未恢复组(82.53±47.90μg／ml)较恢复组(203.05±112.94μg／ml)明显降低(P＜0.01)；与凝血酶原活动度(Rho=0.493，P＜0.01)和血清白蛋白水平显著正相关(Rho=0.420，P＜0.01)，与血清总胆红素水平显著负相关(Rho=—0.463，P＜0.01)；与血清TNF—α水平显著负相关(Rho=—0.378，P＜0.01)。(2)胎球蛋白A与精胺的联合应用显著抑制了LPS刺激下人PBMC分泌TNF-α(24.89±7.71 pg／ml)和IL-6(112.91±37.80 pg／ml)的水平(P＜0.01)。 (3)采用析因实验法筛选出D-GalN 800 mg／kg+LPS 0.04 mg／kg和D-GalN 600 mg／kg+LPS 0.5 mg／kg均为合适建模剂量组合，并通过验证实验确证。(4)在FHF小鼠模型中，随着肝损伤的加重，胎球蛋白A的表达逐渐减少，胎球蛋白AmRNA的表达量下降早于蛋白。免疫组化的结果显示胎球蛋白A主要在肝细胞的胞浆中表达，部分在胞膜表达。(5)胎球蛋白A干预明显降低FHF小鼠的病死率(由83％降至25％，P＜0.05)，明显降低血清ALT的水平(由291370.76±29241.68nkat／L降至31585.15±4086.35 nkat／L，P＜0.05)，降低血清和肝组织中TNF—α和IL-6的水平(P＜0.05)，减轻肝组织炎症坏死程度，减轻肝细胞凋亡的程度(凋亡指数由FHF模型组的23.10±7.39降至2.20±2.97，P＜0.05)。 结论：(1)慢性重型肝炎患者的血清胎球蛋白A水平与肝脏损害严重程度、血清TNF-α水平及预后密切相关。(2)胎球蛋白A和精胺合用可以有效抑制LPS刺激下人PBMC释放TNF-α和IL-6。(3)以析因实验法建立一种规范、重复性好、费效比低的FHF模型；在该模型中，随着肝损伤的加重，胎球蛋白A的表达逐渐减少；胎球蛋白A的干预可以改善由D-Galn和LPS诱导的暴发性肝衰竭，其可能的机制之一是通过抑制TNF-α和IL-6等炎症介质的表达。
【图文】：

巨.到图2一1:各实验组中TNF-Q的浓度2.2.2各实验组中PBMC分泌IL一6的量(见表2一2，，图2一2)(一)PBMC在受到 LPS(100ng/ml)刺激后，释放大量的IL一 6(581.05士122.89Pg/m1)(见表2一2，图2一2，第2组);

3，4，5组;洲 #P<0.05vsl只，3，4，6组6005004003002001000份到图2一:各实验组上清夜中IL-6的表达量图2.3讨论本研究结果显示在LPS刺激下，人PBMC分泌TNF一Q和IL一6明显增加，与之前的研究结果一致【”，。在精胺同时存在的前提下，胎球蛋白A可以协同作用，抑制这两种炎症介质的释放，胎球蛋白A和精胺合用可以明显增强抑制作用显著精胺是一种常见的内生性生物胺，在炎症和感染的部位明显增加。把精胺加
【学位授予单位】：中南大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2007
【分类号】：R575.3

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本文编号：2641683