当归补血汤对熊去氧胆酸应答不良的原发性胆汁性胆管炎细胞免疫的研究

发布时间：2020-04-28 01:17

【摘要】：原发性胆汁性胆管炎(Primary biliary cholangitis,PBC),又称原发性胆汁性肝硬化(Primary biliary cirrhosis),是以胆汁淤积为主要临床表现的自身免疫性肝病。胆管上皮细胞既是遭受免疫破坏的靶细胞,又在PBC发展中起着免疫调节作用。目前首选熊去氧胆酸(Ursodeoxycholic acid,UDCA)治疗,但仍有30%左右患者对UDCA应答不良。中医药在本病的研究上还处于百家争鸣的状态。本课题回顾近年来PBC中外研究进展,开展了当归补血汤对UDCA应答不良的PBC细胞免疫机制方面的研究。目的:探讨当归补血汤对人肝内胆管上皮细胞迁移、增殖、凋亡的影响,并进一步探讨可能的机制。方法:高速离心法制备当归补血汤原液,以培养基稀释后培养人肝内胆管上皮细胞。采用划痕实验检测当归补血汤对胆管上皮细胞迁移能力的影响;CCK-8法检测当归补血汤对胆管上皮细胞增殖能力的影响;流式细胞术检测当归补血汤对胆管上皮细胞凋亡的影响;LDH释放法检测当归补血汤对PBC患者外周血CD8+T细胞介导的胆管上皮细胞损伤的影响;实时荧光定量PCR检测当归补血汤对胆管上皮细胞中CCN1 mRNA的相对表达量。结果:在当归补血汤的干预下,与空白对照组相比,实验组细胞迁移和增殖能力增强(P0.05),凋亡率无明显减少(P0.05),且能减轻PBC患者外周血CD8+T细胞对HiBEC的细胞毒性(P0.01),增加胆管上皮细胞中CCN1 mRNA的相对表达量(P0.01)。结论:当归补血汤可以通过调控CCN1蛋白的表达促进胆管上皮细胞增殖迁移,以减轻免疫介导的胆管损伤。
【图文】：

运用ＣＣＫ８检测细胞增殖力，经不同浓度当归补血汤及ＣＣＮ１刺激ＨｉＢＥＣ后，Ｏｈ各组间差异逡逑无统计学意义（／＾Ｏ．邋０５），而２４小时、４８小时、７２小时后，与空白对照组比，实验组０Ｄ逡逑值明显上升，结果如图２所示，差异具有统计学意义（／＞＜０．邋０５）。逡逑２．０－，邋ＢＬＡＮＫ逡逑２ｇ／Ｌ邋＊逦＊邋＊逡逑＋邋４ｇ／Ｌ邋＃逦ｊｉ逡逑０．０－１逦１逦１逦１——逡逑０逦２４逦４８逦７２逡逑Ｔｉｍｅ（ｈ）逡逑图２当归补血汤对ＨｉＢＥＣ增殖的影响。当归补血汤组与空白对照组折线图（＊／Ｘ０．０５，逡逑＊＊／＊＜０？邋０１，＊＊＊７Ｘ０．邋００１，＊＊＊＊Ｐ＜0．邋０００１，邋＃同＊）。逡逑１．３．邋３当归补血汤对Ｈ邋ｉ邋ＢＥＣ凋亡的影响逡逑运用流式细胞技术，经不同浓度当归补血汤刺激ＩＨＢＥＣ后检测细胞凋亡，结果如图３所示，逡逑与空白对照组比，实验组比空白对照组有减少趋势，但统计学无明显差异（户＞0．邋０５）。逡逑Ａ邋４邋＊１逦Ｂ邋■？邋＂５逦Ｃ邋－Ｉ邋＂１逡逑１０邋？邋Ｑ１逦Ｑ２逦１０邋４0１逦０２逦１０邋；邋０１逦Ｑ７逡逑■邋６邋５２逦２．８０逦ｊ邋５．０４逦３１０逦７邋３？逦？６５逡逑１。３邋■逦ｉｄ３邋＂ｊ逦ｉ0Ｊ邋１逡逑０邋１８７邋８＾逦２．９０逦0邋＊８．４邋＾逦２．６４逦。卡７邋２邋ｆ逦２邋８０逡逑，0逦￣ｔ－ｔ邋－ｍ，￣？—ｒ－ｒ－ｒｍ＾邋，0逦＿邋■邋Ｉ＇ｌＰ＾邋＇邋＇邋Ｉ邋ｍ＂｜邋邋邋邋邋邋Ｊ邋Ｗ邋－＾■￥N；．．Ｉ邋．ｉ邋■邋￣■丨＂＇

根据ＬＤＨ释放计算ＴＯＣ患者ＣＤ８＋Ｔ细胞对不同浓度当归补血汤处理的ＨｉＢＥＣ的细胞毒性。逡逑因个体差异，不同患者ＣＤ８＋Ｔ细胞对ＨＷＥＣ的细胞毒性存在差异，故选取其中一个患者，逡逑结果如图４所示，其结果符合总体趋势。与空白组对比，实验组的细胞毒性明显减轻，差逡逑异具有统计学意义（Ｐ＜0．邋０１）。逡逑＿邋＿邋＊★逡逑８０１邋Ｉ邋邋逦１逡逑置逦■逡逑卜ｊ逦ｉ逡逑ｏＷ＿＿，逦逦逡逑／，，逡逑图４当归补血汤对ＰＢＣ患者ＣＤ８＋Ｔ细胞介导的ＨｉＢＥＣ细胞毒性的影响。ＬＤＨ释放法检测逡逑ＰＢＣ患者外周血ＣＤ８＋Ｔ细胞对ＨｉＢＥＣ的细胞毒性柱状图（＊＊Ｐ＜０．邋０１，＊＊＊Ｐ〈０．邋００１）逡逑１．３．逦５经当归补血汤处理后ＨｉＢＥＣ中ＣＧＮ１的相对表达量逡逑运用ｑＲＴ－ＰＣＲ技术检测经当归补血汤处理后ＨｉＢＥＣ中ＣＣＮ１的相对表达量，结果如图５所逡逑示，，与空白组对比，实验组ＣＣＮ１的相对表达量明显上升，差异具有统计学意义（尸＜０．０１）。逡逑Ｃ逡逑0逡逑Ｓ邋２－°１逡逑￡邋＊＊逡逑泛邋１５＿逦邋１逡逑０）逦—ｊ—逡逑Ｑ）逦里逡逑卜Ｊ｜逡逑°邋／邋／逡逑图５经当归补血汤处理后ＨｉＢＥＣ的ＣＣＮ１的相对表达量柱状图（林／ＸＯ．邋０１）逡逑１．３．逦６邋ＣＣＮ１对ＨｉＢＥＣ迁移力的影响逡逑２邋０逡逑
【学位授予单位】：南京中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R575.7

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本文编号：2642879