NOD1-TLR3配体刺激小鼠肝窦内皮细胞诱导HBV抗原特异T细胞增殖

发布时间：2020-05-04 17:34

【摘要】：目的肝窦内皮细胞细胞（Liver sinusoidal endothelial cells,LSECs）是肝内主要抗原递呈细胞，可将抗原递呈至T细胞，并诱导多种类型T细胞产生免疫耐受。目前尚缺乏HBV通过LSECs诱导T细胞免疫耐受的研究报道。我们的研究目的在于阐明肝窦内皮细胞在HBV感染获得性免疫应答中的功能，并研究通过天然免疫刺激剂（NOD1与TLR3配体）刺激LSECs，激活HBV的特异性免疫应答及其可能的机制。为抗HBV免疫干预新策略的研究提供了理论依据。方法 1.用胶原酶灌注与抗-CD146免疫磁珠分离方法分离C57BL/6小鼠LSECs。 2.尾静脉高压水注射PSM2质粒方式构建含HBV抗原特异T细胞小鼠模型。抗CD90.2磁珠分离方法分离HBV特异T细胞。 3. CFSE染色检测NOD1、TLR3配体单独或联合刺激LSECs诱导的HBV特异T细胞增殖情况。 4.用NOD1、TLR3配体单独或联合刺激LSECs,3h收集细胞，，定量RT-PCR检测IFN-β、IFN-γ、ISG15、IRF3、IL-6、TNF-α、TGF-β、IL-10、CCL2、CCL5、CXCL1、CXCL2、CXCL9、CXCL10、β-actin mRNA表达水平。20h收集细胞及上清，流式细胞术检测细胞表面分子：MHC-Ⅱ、CD80、CD86、PD-L1、CD106、CD54。定量ELISA检测细胞上清中的细胞因子：IFNα/β/γ、TNF-α、IL-6。结果 1. NOD1-TLR3协同刺激促进小鼠LSECs诱导HBV抗原特异T细胞增殖。 2. NOD1-TLR3协同刺激上调小鼠LSECs趋化因子包括，CCL2、CCL5、CXCL1、CXCL2、CXCL9、CXCL10mRNA表达水平。 3. NOD1-TLR3协同刺激上调小鼠LSECs粘附分子（CD54、CD106）的表达。 4. NOD1-TLR3刺激促进LSECs分泌促炎性因子（IL-6、TNF-α）。结论 1. LSECs对HBV抗原（HBsAg/HBeAg）的提呈不能诱导HBV特异性T细胞的增殖。 2.而模式识别受体（NOD1与TLR3）配体协同刺激可介导LSECs由免疫抑制状态转变为免疫激活状态，诱导HBV特异性T细胞体外增殖。其可能机制包括：LSECs中NOD1与TLR3共同激活后，首先可诱导LSECs分泌多种趋化因子募集T细胞；诱导表面粘附分子CD54和CD106明显上调，可能通过增强免疫突触的形成促进T细胞与内皮细胞之间的粘附，为T细胞提供增殖活化信号。另外诱导促炎性细胞因子IL6及TNF-α表达，可可能作为辅助因子增强信号分子诱导的淋巴细胞增殖效应。本研究的创新点 1.我们的结果第一次显示了HBV通过LSECs诱导了抗原特异性T细胞免疫耐受。 2.初步阐明了NOD1-TLR3的刺激可改变LSECs对HBV特异性T细胞应答的免疫抑制状态及其可能的机制。探索了NOD-TLR激动剂作为免疫调节剂的可能性，为抗HBV免疫干预新策略的研究提供了理论依据。本研究的意义NOD1-TLR3介导的LSECs可参与HBV感染中特异性免疫应答的激活，为探索NOD1-TLR3激动剂作为免疫调节剂和疫苗佐剂的应用前景以及为抗病毒免疫干预新策略的研究提供理论依据。
【学位授予单位】：华中科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R575

【参考文献】