瘦素对体外脂变HL-02细胞内甘油三酯含量的影响

发布时间：2020-05-04 20:04

【摘要】： 目的:观察瘦素对体外脂质变性人肝L-02细胞甘油三酯含量以及OB-Rb(瘦素受体)、STAT3(信号转导和转录激活子蛋白3)、MTP(微粒体甘油三酯转移蛋白) mRNA表达的影响,以推断瘦素、瘦素受体及其后信号通路,与非酒精性脂肪肝之间的可能关系,以探讨瘦素调节脂变肝细胞内脂质代谢的作用机制,为今后进一步研究提供理论依据。 方法:采用随机对照研究,以离体人肝L-02细胞为研究对象。用10%(V/V)医用脂肪乳注射液和10%(V/V)胎牛血清的RPMI-1640完全培养基孵育人肝L-02细胞24小时,制备肝细胞脂肪变性模型。后分别加入重组人瘦素(10-6mol/L、10-7mol/L、10-8mol/L)孵育24小时,油红O染色观察细胞形态和细胞内脂滴的形成情况,高效液相色谱法检测细胞内甘油三酯的含量,半定量RT-PCR法检测MTP、OB-Rb和STAT3的mRNA表达。从而确定瘦素改善细胞脂肪变性的最佳浓度,作出量效关系。然后以瘦素最佳浓度分别孵育模型组细胞0h、6h、12h、24h、48h,使用上述观察方法,从而确定瘦素改善细胞脂肪变性的最佳时间,作出时效关系。实验数据以x±s表示,用SPSS13.0统计软件对数据进行分析,以P0.05作为差异显著性标准。 结果:用脂肪乳注射液孵育人肝L-02细胞24小时后,经油红O染色后倒置显微镜观察,人肝L-02细胞浆内见大量红色的小泡性脂滴;高效液相色谱法检测示细胞内甘油三酯含量明显增高,成功的制备肝细胞脂肪变性模型。加入瘦素(10-8mol/L、10-7mol/L、10-6mol/L)孵育24小时后,油红O染色示胞浆内脂滴与模型组比较明显减低;高效液相色谱法结果发现细胞内甘油三酯含量随瘦素剂量的增高而降低;半定量RT-PCR法检测各组细胞的OB-Rb及其目标基因STAT3、MTP的mRNA水平,结果显示:瘦素处理组较模型组相比,OB-Rb及其目标基因的mRNA表达明显上升,有统计学意义(P0.05)。以瘦素(10-7mol/L)浓度为处理浓度,分别孵育模型组细胞0h、6h、12h、24h、48h后,结果发现:瘦素呈时间依赖性的降低脂变细胞内甘油三酯含量,同时呈时间依赖性的增加OB-Rb及其目标基因的mRNA的表达。 结论: 1.瘦素能降低体外人L-02脂变肝细胞内甘油三酯的含量,呈时间、剂量依赖关系。 2.瘦素能促进OB-Rb及其目标基因STAT3、MTP基因的表达增强,呈剂量依赖关系。 3.瘦素降低细胞内甘油三酯作用可能与OB-Rb及其目标基因表达上调有关。 4.人L-02脂变细胞内,可能存在以瘦素受体数量减少为原因的瘦素抵抗。
【图文】：

实 验 结 果1 肝细胞脂肪变性模型的建立：正常肝细胞为多边形，胞核圆形，蓝染, 胞膜界限清楚，细胞浆丰富，浆内可见少量脂滴，呈红色圆形，人肝 L-02 细胞用等体积的含体积分数 10医用脂肪乳注射液和 10%胎牛血清的 RPMI-1640 完全培养基孵育人肝 L-02 胞 24 小时后，油红 O 染色显示胞浆内见大量红色的小泡性脂滴，肝细胞肿大细胞核位于细胞中央，，符合肝细胞小泡性脂肪变性特征（见图 1、2）。高效相测定细胞内总甘油三酯含量，模型组与正常组比较，细胞内总甘油三酯含由 0.425±0.012mmol/g 蛋白上升至 1.592±0.238mmol/g 蛋白,明显增高，差别统计学意义(p<0.01)，（见图 3）。

实 验 结 果1 肝细胞脂肪变性模型的建立：正常肝细胞为多边形，胞核圆形，蓝染, 胞膜界限清楚，细胞浆丰富，浆内可见少量脂滴，呈红色圆形，人肝 L-02 细胞用等体积的含体积分数 10医用脂肪乳注射液和 10%胎牛血清的 RPMI-1640 完全培养基孵育人肝 L-02 胞 24 小时后，油红 O 染色显示胞浆内见大量红色的小泡性脂滴，肝细胞肿大细胞核位于细胞中央，符合肝细胞小泡性脂肪变性特征（见图 1、2）。高效相测定细胞内总甘油三酯含量，模型组与正常组比较，细胞内总甘油三酯含由 0.425±0.012mmol/g 蛋白上升至 1.592±0.238mmol/g 蛋白,明显增高，差别统计学意义(p<0.01)，（见图 3）。
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2007
【分类号】：R575.5

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本文编号：2648921