肝脏缺血再灌注损伤及益生注射液的干预机理研究

发布时间：2020-05-04 20:48

【摘要】：目的：肝脏缺血再灌注损伤是肝移植不可避免的一个过程，也是一种重要的非免疫学因素，严重时可引起移植肝脏失功、其它器官损伤甚至病人死亡。因此，缺血再灌注损伤严重影响移植肝脏的存活质量，寻找有效的干预措施是肝移植面临的一项重要课题。 缺血再灌注损伤还可通过上调移植相关抗原的表达，加剧移植排斥反应，加速移植物的慢性失功。大量证据表明MHC Ⅰ类分子相关抗原(MIC)与移植物排斥密切相关，但是缺血再灌注损伤能否引起MIC的表达尚无报道。 本文在前期研究基础上进一步研究益生注射液(Yisheng Injection，YS)抗肝脏缺血再灌注损伤的作用机制以及肝脏缺血再灌注损伤对小鼠MIC(RAE-1、H60)基因表达的影响和益生注射液的干预效果。 方法：采用小鼠部分肝脏热缺血再灌注损伤模型研究益生注射液的干 四川大学博士学位论文 预机理以及RAE一1、H60基因的表达。 l)C57BL/6小鼠随机分为5组:假手术组(Sham)、模型组(I瓜)、YS 小剂量(5m眺g)干预组、YS中剂量(10m酬kg)干预组和YS大剂量 (ZOmg/kg)干预组。缺血前24小时和1小时YS干预组小鼠腹腔注射 分别给予5、10或20mg/kg的YS，，钳夹肝左叶造成部分肝脏缺血gomin， 再灌注时经尾静脉注射第三次给予同样剂量的YS，模型组和假手术组给 予同样体积的生理盐水。 小鼠肝脏左叶缺血90min再灌注6h后各实验组采集血液和肝脏左叶 组织样本。检测血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、门冬氨酸氨转移酶 (AST)和乳酸脱氢酶(LDH)的活性作为肝脏损伤的指标，同时用ELISA 检测血清中TNF一。的含量。检测肝组织中髓过氧化物酶(MPo)、超氧化 物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)含量以及肝脏水肿程度。肝脏组织病理 学检测。RT-PCR和免疫组化检测肝组织中INF一Q和ICAM一1的表达。 2) BALB/C小鼠随机分为2组:假手术组(S ham)和模型组(I瓜)。模 型组小鼠肝脏左叶缺血90min再灌注。假手术组(s ham)和模型组(I瓜)手 术后l、2、3、5、7、10、15、20、30天肝脏左叶组织分别取样。采用 Rr-pCR和real一time pCR检测RAE一l、H6o基因在各实验组的表达。 3)BALB/C小鼠随机分为3组:假手术组(sham)、模型组(I瓜)和 YS大剂量(20mg/kg)干预组。模型组和YS干预组小鼠肝脏左叶缺血 90min再灌注。缺血前24小时和1小时YS干预组小鼠腹腔注射给予 20mg瓜g的YS，再灌注时经尾静脉注射第三次给予同样剂量的YS。再 灌注后YS干预组每天给予20m留kg的YS直至再灌注后第7天。模型组 和假手术组给予同样体积的生理盐水。手术后7天肝脏左叶组织分别取 样，采用real·time PCR检测RAE一1、H60基因在各实验组的表达。 结果:l)益生注射液干预能有效降低小鼠部分肝脏热缺血90min再灌 注6h所致的血清ALT、AST、LDH水平升高，降低血清中飞NF一a含量， 四川大学博士学位论文 干预后血管内皮、肝窦内皮和肝细胞形态结构相对正常，血管和胆管周 围淋巴细胞浸润减轻。 2)益生注射液干预能有效减轻缺血再灌注所致肝脏过氧化损伤，提 高缺血肝脏中SOD酶活性、降低MDA含量。 3)益生注射液干预能有效降低缺血肝脏中MPO含量，减轻中性粒 细胞的聚集和浸润，减轻缺血肝脏的水肿程度。 4)益生注射液干预能有效抑制缺血肝脏中TNF一a和ICAM一1分子 在mRNA水平和蛋白质水平的高表达。 5)益生注射液(5、10、20mg瓜g)干预肝脏热缺血再灌注损伤具有 良好的剂量一效应关系。 6) BALB/C小鼠正常肝脏组织能检测到RAE一1低表达。小鼠部分 肝脏热缺血90min再灌注，可造成缺血肝脏中RAE一1 mRNA水平从再灌 注第5天开始显著升高，巧天达峰值，一直持续到再灌注后30天，比 对照组升高3一8倍。 7)BALB/C小鼠正常肝脏组织未检测到H60的表达。肝脏热缺血 90min再灌注，可造成缺血肝脏中H60 mRNA水平从再灌注第1天开始 显著升高，第5天达峰值，以后逐渐下降，直到再灌注后10天，比对照 组升高2.5一8.5倍。但从再灌注15天开始到再灌注后30天，缺血肝脏的 H6O mRNA水平与对照组相比无显著性差异。 8)益生注射液(2 omg/kg)干预可显著降低缺血肝脏中RAE一1、H60 mRNA水平。干预组缺血肝脏中RAE一1、H60 mRNA水平与I瓜组相比 分别下降70%(P0.01)和76%(P0.01)。 结论:益生注射液干预能减少肝脏缺血再灌注后氧自由基的产生，减轻 脂质过氧化引发的肝组织损伤;降低中性粒细胞浸润和肝脏水肿程度; 有效抑制缺血再灌注损伤引起的TNF一a、ICAM一1 mRNA水平上调，降 低下NF一a和ICAM一1在肝组织中的高表达;具有良好的剂量一效应关系。 四川大学博士学位论文 小鼠肝脏缺血再灌注损伤可上调缺血肝脏中RAE一1、H60 mRNA 水平，且二者上升时相不同。益生注射液干预可显著降低缺血肝脏中 RAE一l、H60 mRNA水平。 关键词:肝脏缺血再灌注损伤，益生注射液，RAE一1基因，H60基因， 荧光定量PCR
【图文】：

ICAM一1mRNA的表达强弱。与Sham组相比，I瓜可导致ICAM一1mRNA表达明显上调，5、10和20mg/kgYS干预能程度不同地抑制ICAM一1mRNA的表达(图1一14A)。各组间电泳条带强弱的比较显示随着剂量的增加，YS能显著抑制ICAM一1mRNA的表达(图1一14B)。

为了进一步检测缺血再灌注损伤后RAE一1基因表达量的变化及其规律，采用real一timePCR检测sham组和I瓜组小鼠肝脏中的RAE一1mRNA量相对于正常肝脏组织的变化倍数。结果见图2一2，Sham组小鼠肝脏中的RAE一1mRNA量与正常肝脏组织接近;而I瓜组小鼠肝脏中的RAE一1mRNA量相对于正常肝脏组织及sham组有较大差异，再灌注1一3天缺血肝脏中的RAE一1mRNA量与sham组相比无显著差异，但从再灌注5天开始缺血肝脏的RAE一1mRNA水平相对于sham组显著升高，15天达峰值，一直持续到再灌注后30天，与对照组比较升高3一8倍。此结果所示的RAE一1mRNA变化规律与以上RT-PCR结果一致。
【学位授予单位】：四川大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2004
【分类号】：R575

【参考文献】

相关期刊论文 前4条

1 杨华蓉,陈嘉钰,蔡绍晖,李幼平,唐琼,刘于宾;YMB注射液对大鼠血液流变学的影响[J];华西医科大学学报;2000年02期

2 李胜富,蒋红梅,李幼平,吴大蓉,张立,张t

本文编号：2648973