炎性环境下LPS对肠神经胶质细胞增殖及凋亡影响的体外研究

发布时间：2020-05-05 00:47

【摘要】：目的:研究炎性环境下LPS对肠神经胶质细胞增殖及凋亡的影响,并初步探讨其机制。方法:1.体外培养大鼠肠神经胶质细胞株(enteric glial cells,EGCs),采用免疫荧光染色法检测EGCs中纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)及钙结合蛋白S-100β表达情况;2.将EGCs分为空白对照组、TNF-α+IFN-γ组、LPS+TNF-α+IFN-γ组、TNF-α+IFN-γ+RET受体抑制剂组、LPS+TNF-α+IFN-γ+RET受体抑制剂组,采用MTT比色法、BrdU法检测EGCs增殖活力;TUNEL染色法、Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞术、Hoechst33342染色法检测EGCs凋亡情况;Caspase-3活性试剂盒检测EGCs的Caspase-3相对活性;蛋白免疫印迹法检测RET、PI3K、AKT、p-AKT蛋白的相对表达水平。结果:1.免疫荧光染色结果显示本实验所用细胞株可同时表达GFΑP及钙结合蛋白S-100β;2.MTT结果显示,与正常对照组相比,不同浓度的LPS(100,200,400μg/mL)抑制EGCs增殖(P0.05),不同浓度的TNF-α(50,100,200ng/mL)+IFN-γ(100ng/mL)明显降低EGCs生存率(P0.05)。MTT及BrdU结果显示,与TNF-α(50 ng/mL)模型组对比,LPS处理使细胞增殖能力显著降低(P0.05)。同时,在TNF-α+IFN-γ组及LPS+TNF-α+IFN-γ组中,RET受体抑制剂处理后,EGCs细胞增殖能力均进一步降低(P0.05)。3.TUNEL染色结果和流式细胞术(Annexin V-FITC/PI双染法)检测结果均显示各组间EGCs凋亡无显著变化,组间无统计学差异(P0.05)。Hoechst 33342细胞凋亡形态学观察结果显示各组中无明显核偏移现象,凋亡小体数目无明显改变。Caspase-3活性试剂盒检测结果显示各组间Caspase-3的相对活性无显著变化,差异无统计学意义(P0.05)。4.蛋白免疫印迹法检测结果显示:与正常对照组相比较,TNF-α+IFN-γ组EGCs中RET、AKT、p-AKT蛋白相对表达量下调(P0.05)。与TNF-α+IFN-γ模型组对比,LPS处理使EGCs中RET、AKT、p-AKT蛋白相对表达量降低(P0.05)。同时,对于TNF-α+IFN-γ组及LPS+TNF-α+IFN-γ组,RET受体抑制剂处理后EGCs中RET、AKT、p-AKT蛋白相对表达量均进一步降低(P0.05)。各组中EGCs细胞内PI3K的表达水平并无显著的差异(P0.05)。结论:1.本实验所用细胞株经鉴定为大鼠肠神经胶质细胞株。2.炎性环境下LPS可抑制EGCs增殖,其机制可能与抑制RET及PI3K/AKT信号通路有关;炎性环境下LPS对EGCs凋亡无明显影响。
【图文】：

细胞株GFΑP蛋白、S100β蛋白表达情况

图 3.9 Hoechst 染色法观察 EGCs 凋亡情况 (放大倍数，100 .4 Caspase-3 活性试剂盒检测 EGCs Caspase-3 表达情况
【学位授予单位】：兰州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R574

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 向辰;;治疗脑瘤的一种新方法[J];生物学通报;1988年02期

2 林启祥;;神经胶质成熟因子[J];国外医学情报;1984年04期

3 顾继杰;神经胶质生长因子研究进展[J];基础医学与临床;1994年06期

4 靳仕信;;十一、神经胶质[J];遵义医学院学报;1978年02期

5 党红波,葛均波,王克强,虞勇,张英明,史剑慧;神经胶质生长因子对阿霉素中毒性心肌细胞的影响[J];解剖学杂志;2002年06期

6 胡人义，范淑荣;大白鼠海马神经毯内神经胶质突起与神经无突起间关系的超微结构研究[J];神经解剖学杂志;1994年01期

7 曹瑞治,刘康;神经胶质生长因子对周围神经损伤后作用的组织学观察[J];山西医科大学学报;2000年06期

8 程涓;张策;;神经胶质-免疫机制在疼痛中的作用[J];中国康复理论与实践;2008年06期

9 王伍超;郭晓丽;胡理;;神经胶质细胞活化在神经病理性疼痛中的作用研究进展[J];中国疼痛医学杂志;2017年08期

10 崔梅影;;人类神经胶质瘤细胞株的带型[J];国外医学.医学遗传学分册;1979年01期

相关会议论文 前10条

1 陈倩;杨樟;徐祖才;;神经胶质互动调控腺苷水平在癫痫中的作用研究[A];中华医学会神经病学分会第十次全国脑电图与癫痫诊治进展高级讲授班及学术研讨会日程册&论文汇编[C];2015年

2 范斌;谷剑秋;郭阳;;碧萝芷对小神经胶质细胞活化的影响[A];中华医学会第十七次全国神经病学学术会议论文汇编（上）[C];2014年

3 ;神经胶质[A];中国解剖学会2010年年会论文文摘汇编[C];2010年

4 韦有恒;韩海雄;曹跃琼;;CMTM3基因在人神经胶质肿瘤发生发展中功能的初步研究[A];2010’全国肿瘤分子标志及应用学术研讨会暨第五届中国中青年肿瘤专家论坛论文汇编[C];2010年

5 ;神经胶质[A];中国解剖学会2009年年会论文文摘汇编[C];2009年

6 ;神经胶质[A];中国解剖学会2008年年会论文文摘汇编[C];2008年

7 岳文慧;邬力祥;黄柏胜;刘发益;罗洁;;肥大细胞脱颗粒液对大鼠神经胶质瘤细胞凋亡的影响[A];传承与发展，，创湖南省生理科学事业的新高——湖南省生理科学会2011年度学术年会论文摘要汇编[C];2011年

8 张秀丽;;马桑内酯致痫大鼠海马区谷氨酸(Glu)和γ-氨基丁酸(GABA)在神经元和神经胶质内含量变化研究[A];第九次全国神经病学学术大会论文汇编[C];2006年

9 石健;麻彤辉;;神经胶质成熟因子beta(GMFβ)在小鼠脑积水病理条件下的表达分析[A];吉林省第六届生命科学大型学术报告会论文集[C];2008年

10 张秀丽;郑德枢;邓平;孙卫文;陈盛强;;马桑内酯致痫大鼠海马神经胶质细胞形态学及化学性质研究[A];解剖学杂志——中国解剖学会2002年年会文摘汇编[C];2002年

相关博士学位论文 前4条

1 李雷;Rig-I调控化学缺氧诱导神经胶质炎症机制研究[D];南京医科大学;2018年

2 左鹏;神经胶质成熟因子γ在斑马鱼血管芽细胞迁移和卵巢癌侵袭转移中的作用及机制研究[D];浙江大学;2014年

3 匡晓燕;神经胶质成熟因子-β介导胶质瘤源性血管新生的作用及其机制初探[D];第三军医大学;2015年

4 廖永晖;脊髓星形胶质细胞在Ⅱ型糖尿病小鼠机械痛敏中的作用及其机制研究[D];第四军医大学;2011年

相关硕士学位论文 前6条

1 李峗;炎性环境下LPS对肠神经胶质细胞增殖及凋亡影响的体外研究[D];兰州大学;2019年

2 石健;神经胶质成熟因子beta (GMFβ) 在小鼠脑积水病理条件下的表达分析[D];东北师范大学;2009年

3 邵杰;内皮抑素对胶质瘤细胞增殖的影响研究[D];苏州大学;2012年

4 陈亮;CD82/KAI1和CD9/MRP-1在神经胶质瘤细胞株中的表达及表达意义的初步研究[D];重庆医科大学;2010年

5 乔保华;PPARγ激动剂吡格列酮减轻大鼠创伤性脑损伤胶质反应及神经保护作用的研究[D];山东大学;2010年

6 田伟;中药丹参舒颈丸治疗颈髓受压的实验研究[D];中国中医研究院;2005年

本文编号：2649248