慢性丙型肝炎抗病毒过程中T细胞亚群及其表面PD-1的表达变化

发布时间：2020-05-06 13:37

【摘要】：目的：HCV感染后大约80％可发展成慢性丙型肝炎（chronic hepatitisC，CHC），目前HCV感染慢性化的确切机制尚不明确。在感染初期机体缺乏强有力的HCV特异性CD4~+和CD8~+T淋巴细胞免疫应答可能是其呈慢性化发展的主要原因之一。程序性死亡受体-1（programmed death-1，PD-1）是表达于T细胞和B细胞表面的负性共刺激分子，在T、B细胞的免疫应答中起负向调控作用。PD-1与其配体PD-L1或PD-L2结合，可以削弱、限制或终止T细胞发挥功能。最近有研究发现，慢性HCV感染患者外周血T细胞PD-1的表达明显高于正常人，同时T细胞处于功能耗竭状态。然而，在应用干扰素联合利巴韦林抗病毒治疗的过程中，随着HCV-RNA的下降，T淋巴细胞及其表面PD-1的表达变化情况鲜有报道。本研究旨在探讨在CHC抗病毒治疗过程中，随着HCV-RNA的下降，外周血CD4~+T细胞和CD8~+T细胞及其表面PD-1的表达变化情况及其意义。方法：选取慢性HCV感染者25例，其中男性患者11例，女性患者14例，所有患者均符合抗病毒治疗标准，且半年之内未经其他抗病毒治疗及免疫调节治疗，所有患者均应用聚乙二醇干扰素联合利巴韦林抗病毒治疗，以抗病毒治疗的0周、4周、12周、24周及48周分组。健康对照10例。 1所有受试者留取新鲜抗凝外周静脉血，采用密度梯度离心法分离外周血单核细胞（peripheral blood mononuclear cell，PBMC），用CD3-ECD、CD4-FITC、CD8-PE-Cy5、PD-1-PE抗体进行染色，并应用流式细胞仪检测外周血CD4~+T细胞和CD8~+T细胞及其表面的PD-1的表达情况。 2所有受试者留取新鲜抗凝外周静脉血，密度梯度离心法分离PBMC，用逆转录聚合酶链反应（reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR）的方法，检测PBMC上PD-1mRNA的表达情况。结果： 1临床转归：25例患者中18例（72%）获得RVR；5例（20%）获得EVR；2例（8%）获得PVR；25例（100%）获得ETVR。 2CHC患者在抗病毒治疗过程中，T细胞亚群的变化：与正常对照组相比，丙型肝炎患者CD4~+T增高，CD8~+T降低，，CD4~+/CD8~+增高，除48周组无统计学意义外，其他各组均有显著统计学意义（P＜0.01）；干扰素联合利巴韦林抗病毒治疗后，与0周组比较，CD4~+T细胞逐渐降低，除4周组无统计学意义外，其他各组均有显著统计学意义（P＜0.01）；CD8~+T细胞逐渐升高，均有显著统计学意义（P＜0.01）；CD4~+/CD8~+逐渐降低，均有显著统计学意义（P＜0.01）。 3CHC患者在抗病毒治疗过程中，CD4~+T细胞上PD-1的表达变化：与正常对照组（2.92±0.87）相比，丙型肝炎患者CD4~+T细胞上PD-1的表达（0、4、12、24、48周组：8.95±1.55，6.53±1.06，6.42±0.87，5.12±0.58，4.42±0.58）明显升高（P＜0.01）；干扰素联合利巴韦林抗病毒治疗后，CD4~+T细胞上PD-1的表达逐渐降低，与0周组比较差异有显著统计学意义（P＜0.01）。 4CHC患者在抗病毒治疗过程中，CD8~+T细胞上PD-1的表达变化：与正常对照组（1.11±0.39）相比，丙型肝炎患者CD8~+T细胞上PD-1的表达（0、4、12、24、48周组：5.12±0.87，3.52±0.58，2.62±0.58，1.81±0.29，1.51±0.39）明显升高（P＜0.01）；干扰素联合利巴韦林抗病毒治疗后，CD8~+T细胞上PD-1的表达逐渐降低，与0周组比较差异具有显著统计学意义（P＜0.01）。 5RT-PCR法检测PBMC上PD-1mRNA的表达：与正常对照组（0.81±0.01）相比，丙型肝炎患者PBMC上PD-1mRNA的表达（0、4、12、24、48周组：1.48±0.09，1.36±0.02，1.19±0.01，1.02±0.01，0.82±0.03）明显升高（P＜0.01或0.05）；干扰素联合利巴韦林抗病毒治疗后，PBMC上PD-1mRNA的表达逐渐降低（P＜0.01或0.05）。结论： 1慢性丙型病毒性肝炎患者体内存在着T细胞亚群失衡，抗病毒治疗可以使失衡的T细胞亚群趋于恢复正常，提示T细胞亚群失衡与HCV感染的慢性化有关，T淋巴细胞在清除HCV中发挥重要作用。 2慢性丙型肝炎患者，CD4~+T和CD8~+T细胞表面PD-1及PBMC上PD-1mRNA的表达增强，随着抗病毒时间的延长和HCV-RNA的降低，其表达逐渐降低，提示PD-1的高表达与HCV-RNA的复制有关，PD-1的表达变化可以预测CHC抗病毒治疗的疗效。
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R512.63

【参考文献】