HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者乙型肝炎病毒基因变异的全基因组分析及其与干扰素α疗效的关系

发布时间：2020-05-08 08:35

【摘要】： 目的研究HBeAg阳性慢性乙型肝炎(Chronic hepatitis B, CHB)患者乙型肝炎病毒(hepatitis B virus, HBV)全基因组基因变异及其与干扰素α(interferon,IFN)疗效的关系。 方法PCR扩增并克隆干扰素治疗前慢性乙型肝炎患者血清中HBV全基因组DNA,测序并进行基因变异分析。 结果获得干扰素治疗前慢性乙型肝炎患者来源的33株HBV全基因组DNA,它们均属于C或B基因型。与标准株相比,HBV缺失变异在B、C基因型间的发生率分别为14.3%(2/14)和63.2%(12/19)。其中,HBV pre-S2 nt19-nt56缺失突变只发生在C基因型干扰素治疗有效的患者中,发生率为15.2%(5/33),占C基因型有效病例的50%(5/10)；TP+space区6株缺失变异HBV全基因组DNA中,5例干扰素治疗无效,1例有效。HBV插入突变一例,3460bp,B基因型,干扰素治疗无效。HBV点突变结果显示：4例C基因型ntG2699T变异为干扰素有效病例,占C基因型有效病例的40%,且发生在无pre-S2缺失的病例中。因此,pre-S2缺失变异和ntG2699T变异占C基因型有效病例的90%,可作为预测干扰素应答的因素。另外,体外实验有抗干扰素作用的T1504C、A1762T、G1764AG1896A变异在本研究中对干扰素疗效无影响。TP257研究发现,B基因型的H135Y和Q176H,C基因型的N89D和K142Q/K142E可能有抗干扰素作用。 结论HBV缺失变异在B、C基因型间的发生率存在显著性差异；HBV pre-S2缺失突变和ntG2699T变异与C基因型干扰素应答相关；B基因型的H135Y和Q176H,C基因型的N89D和K142Q/K142E可能有抗干扰素作用。
【图文】：

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.加入400林l等体积的饱和酚(Tris一HCIpH8.0)，振荡混匀，120009，4“C离心10min。.吸取上层水相约350川，加入350闪等体积的酚/氯仿(酚:氯仿:异醇/25:24:1)，振荡混匀，120009，4“C离心10min。.吸取上层水相约300林l，加入l/10倍体积3MNaAc(约30林l)、20酵母tRNA、2.5倍体积无水乙醇(约1ml)，颠倒混匀，一20“C沉淀DNA或过夜。.12，0009离心15分钟，弃去上清，D队沉淀溶于50滩灭菌去离子水，，于一20“C保存。2.2HBV基因组DNA克隆如下图2所示:Hind111SaclHBVS，1821一18413，
【学位授予单位】：福建医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R512.62

【参考文献】

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本文编号：2654413