槟榔的促胃动力作用及其有效组分的探索

发布时间：2020-05-08 10:43

【摘要】：目的： 1.利用甘草制作胃动力低下大鼠模型，观察其胃残留率及小肠推进率的影响； 2.观察槟榔对胃动力低下大鼠胃残留率、小肠推进率的影响，并利用SPECT测定胃半排空时间，观察槟榔对胃动力作用的影响； 3.透射电镜观察槟榔对Cajal间质细胞超微结构的改变及其与周围肠神经系统的关系，免疫组化方法探索槟榔对c-kit在模型大鼠胃组织中表达的影响。 4.采用HPLC对槟榔成分进行分析，观察其对离体胃平滑肌细胞收缩效应的影响，并使用LC-MS分析有效组分。方法： 1.胃动力低下大鼠模型的建立制备生甘草溶液，分为2.5、5、7.5、10、15g/kg5个剂量组，予大鼠每日灌胃，持续5d。以苯酚红测定法，，紫外分光光度计测胃残留率，并测量计算小肠推进率。使用SPECT检测99mTc-MIBI溶液在各组大鼠胃内的半排空时间。 2.槟榔对胃动力的影响采用方法1建立胃动力低下大鼠模型，以莫沙必利作为对照药物，分为模型组（10g/kg甘草）、正常对照组（0.9％NaCl）、西药组（0.4mg/kg莫沙必利）以及中药槟榔组（10g/kg槟榔），灌胃7d后，测量各组大鼠的胃残留率、小肠推进率、胃半排空时间。 3.槟榔对胃内ICC超微结构及c-kit表达的影响造模方法同1，分组方案同2，摘取全胃，并取胃底、胃体、胃窦组织各两块。其中一块制作超薄切片，透射电子显微镜观察记录；另一块制作免疫组化标本，观察c-kit抗体表达，计算阳性细胞面积。 4.槟榔有效组分的分析提取及其对离体平滑肌的作用制备槟榔冻干粉，制作豚鼠平滑肌肌条，观察不同批次提取物对肌条的效应，选取有效批次槟榔提取物，HPLC记录其紫外吸收图谱并提取有效成分，观察其对豚鼠离体平滑肌的收缩效应，LC-MS测定其分子量。结果： 1.不同剂量（2.5、5、7.5、10、15g/kg）甘草溶液灌胃后发现，10g/kg剂量组的胃残留率比其它组别要高，明显高于正常对照组（P＜0.01），且胃半排空时间延长（P＜0.05）。而5g/kg剂量组的小肠推进率与正常对照组相比，具有统计学意义（P＜0.05）。 2.与正常对照组相比，中药槟榔组及莫沙必利组的胃残留率降低（P＜0.05），胃半排空时间缩短，而小肠推进率增大；同时，模型组胃残留率高于其他三组（P＜0.05），胃半排空时间延长。槟榔组与莫沙必利组无统计学差异。 3.电镜观察发现模型组大鼠胃内ICC形状较扁，甚至不规则，向外伸展的突起变短小；其余三组大鼠ICC呈纺锤形,有巨大的卵圆形核及向外伸展的长突起，25000倍放大观察发现，胞质内有丰富的线粒体，大量滑面内质网和粗面内质网。槟榔组ICC与周围的肠神经元轴突间突触样连接增多。四组中，胃内C-kit阳性表达最高部位均为胃窦部，高于胃体部、胃底部。槟榔组的c-kit阳性表达面积最高，尤其在胃窦部（7.97±0.39万μm2）。 4.分取槟榔不同组分进行豚鼠离体平滑肌实验，选取有效组分进行HPLC成分分析，紫外吸收光谱显示69个峰值，其中34、42最高，提取该组分，发现10μmol/L剂量BL42对平滑肌胃环形肌和胃纵行肌的收缩效应最强，其曲线下面积分别为5.96±0.58,5.64±0.52g/s，接近于Ach效应。LC-MS检测发现，该有效成分分子量不同于槟榔碱。结论： 1.在剂量为10g/kg时，中药甘草可以增加大鼠的胃残留率，延长胃半排空时间，因此可以用来建立胃动力低下大鼠模型。 2.槟榔能够降低胃动力低下模型大鼠的胃残留率，缩短胃半排空时间，并增高小肠推进率，推测槟榔具有促进胃动力作用。 3.槟榔能够增加胃动力低下大鼠胃内ICC与周围肠神经系统的联系，并使c-kit在胃窦、胃体、胃底的阳性表达面积加大，提示槟榔的促胃动力作用与ICC具有一定联系。 4.HPLC制备的槟榔内组分BL34、BL42对豚鼠离体平滑肌具有较强收缩效应，且该作用类似于Ach，该物质成分的具体分子结构尚需进一步实验研究。
【图文】：

甘草,对照组,大鼠胃,动物数量

南京医科大学博士学位论文表 1. 各组胃残留率及小肠推进率的比较（ X ±s）组别动物数量药物胃残留率（％）小肠推进率（％）对照组 n=5 0.9％NaCl 51.25±8.44 67.83±10.79实验Ⅰ组n=52.5g/kg 甘草 50.41±10.72 63.37±5.99实验Ⅱ组n=55g/kg 甘草 62.37±12.56 57.0±12.26＃实验Ⅲ组n=57.5g/kg 甘草 70.53±6.29＃59.28±8.34实验Ⅳ组n=510g/kg 甘草 76.49±7.22＊65.42±5.17实验Ⅴ组n=515g/kg 甘草 64.39±11.05＃60.77±8.82与对照组相比，＊P＜0.01，＃P＜0.05。

大鼠胃,对照组

各组大鼠胃半排空时间比较（X±s）.与对照组比较，实验Ⅳ组胃半排空时间延长，＃P＜0.05，n=5
【学位授予单位】：南京医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R285.5;R573

【参考文献】