IGFBPrP1对小鼠肝组织的影响及其机制的研究

发布时间：2020-05-11 23:44

【摘要】： 研究背景： 胰岛素样生长因子结合蛋白相关蛋白1(insulin-like growth-factor binding protein-related protein 1, IGFBPrP1)是近年来发现的一种可溶性分泌蛋白,导师刘立新已有的研究发现：在肝纤维化、肝硬化患者肝组织中IGFBPrP1的表达较正常对照组明显增强[’]；在体外培养的肝星状细胞(hepatocyte stellate cell, HSC)中加入IGFBPrP1可使其合成细胞外基质(extracellular matrix, ECM)增多；用抗IGFBPrP1抗体可逆转由TGFβ1诱导的HSC产生的过多的Ⅰ型胶原(CollagenⅠ);抗IGFBPrP1抗体可通过抑制肝纤维化小鼠HSC的活化、减少ECM的主要成分CollagenⅠ与纤维连接蛋白(fibronectin, FN)的合成及减少肝细胞的凋亡等途径发挥抗纤维化作用。以上研究结果表明IGFBPrP1可能是肝纤维化发生机制中新的致病因子。 那么,IGFBPrP1是否对肝脏具有直接的致纤维化作用呢?其作用机制为何?目前尚无研究报道。为了阐明此问题,设计了本课题。 目的： 明确外源性胰岛素样生长因子结合蛋白相关蛋白1(IGFBPrP1)对在体肝组织的影响,并探讨其可能的机制。 方法： 24只雄性C57BL／6野生型小鼠随机分为3组：正常对照组(8只),腹腔注射等量磷酸盐缓冲液；rmIGFBPrP1 2周组(8只),腹腔注射rmIGFBPrP1,0.015mg/kg,每周7次,持续2周；rmIGFBPrP1 4周组(8只),腹腔注射rmIGFBPrP1,0.015mg/kg,每周7次,持续4周。分别在第2周、4周末处死小鼠。(1)取肝组织,肉眼观察肝组织大体形态；(2)分别对肝组织石蜡切片做HE染色和苦味酸-天狼猩红染色观察肝组织病理变化及胶原纤维形成情况；(3)免疫组织化学染色检测肝组织中Ⅲ型胶原(CollagenⅢ)、转化生长因子β1 (transforming growth factorβ1, TGFβ1)、Smad3及p-Smad2/3的表达；(4)Western blot检测肝组织中IGFBPrP1、纤维连接蛋白(Fibronectin, FN)、Ⅰ型胶原(CollagenⅠ)、TGFβ1、Smad3及p-Smad2/3的相对表达量,并进行IGFBPrP1与其他各指标的相关性分析。 结果： (1)苦味酸-天狼猩红染色分析结果：肝组织中胶原含量在rmIGFBPrP1 2周组较正常对照组明显增多,rmIGFBPrP1 4周组较2周组明显增多(0.45%±0.15% vs 0.21%±0.11%,1.02%±0.33% vs 0.45%±0.15%,P0.05)。 (2)免疫组织化学染色结果显示：rmIGFBPrP1 2周组及4周组肝组织中CollagenⅢ、TGFβ1、Smad3及p-Smad2/3的表达均较正常对照组显著增强,且4周组上述蛋白表达量较2周组高(CollagenⅢ:F=221.858, P0.01; TGFβ1:F=280.571, P0.01; Smad3: F=292.114, P0.01; p-Smad2/3:F=114.251, P0.01)。 (3) Western blot检测结果显示：rmIGFBPrP1 2周组及4周组肝组织中IGFBPrP1、CollagenⅠ、FN、TGFβ1、Smad3及p-Smad2/3的表达均较正常对照组显著增强,且4周组强于2周组(F=20.136、F=6.029、F=17.282、F=7.484、F=20.957、F=87.713,P0.01)。肝组织中IGFBPrP1的表达变化与FN (r=0.890, P0.01)、CollagenⅠ(r=0.921,P0.01)、TGFβ1 (r=0.726, P0.01)、Smad3 (r=0.977, P0.01)及p-Smad2/3 (r=0.809, P0.01)的表达变化呈正相关。 结论： (1)外源性IGFBPrP1可通过增加细胞外基质的主要成分CollagenⅠ,Ⅲ及FN的含量,导致肝组织中ECM过度沉积,对肝脏有直接的致纤维化作用。 (2)外源性IGFBPrP1对肝脏的致纤维化作用是通过TGFβ1/Smad3信号通路来实现的。
【图文】：

观察离体肝组织:正常对照组小鼠肝组织色泽红润，表面光滑，质柔软。n刀IGFBPrPI4周组小鼠肝组织色泽苍白，体积略缩小，质地略脆。n刀IGFBPrP12周组肝组织病理改变介于两者之间(见图1一1)。

n刀IGFBPrP14 rmIGFBPrP12周组病变较轻，汇管区周围有细胞变性及炎细胞浸润。周组大量肝细胞脂肪变性，且有少量肝细胞核碎裂坏死。(见图2一1)。A:正常对照组B:rmIGFBPrP12周组C:rmIGFBPrP14周组图2一1:各组小泉肝组织中RE染色 x400倍3.苦味酸一天狼猩红染色结果该染色方法使胶原在普通显微镜下呈红色。正常对照组小鼠肝组织仅汇管区和肝门静脉周围有少许红色胶原纤维存在。肝组织中胶原含量在rmIGFBPrP12周组较正常对照组明显增多，nn1GFBPrP14周组较2周组明显增多(0.45%士0.巧 %vs0.21%士0.n%，1.02%士 0.33%vs0.45%士0.15%，P<0.05，，见图3一l)。
【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R575.2

【参考文献】

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1 刘毅;刘立新;郭晓红;张骞骞;;IGFBP-rP1对肝星状细胞活化及核因子-κB活性的影响[J];中国病理生理杂志;2008年09期

2 田小霞;秦桂秀;

本文编号：2659254