自身免疫性肝炎小鼠腹腔巨噬细胞功能改变及其在治疗中的作用

发布时间：2017-03-24 20:07

  本文关键词：自身免疫性肝炎小鼠腹腔巨噬细胞功能改变及其在治疗中的作用，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：研究自身免疫性肝炎(autoimmune hepatitis, AIH)模型小鼠腹腔巨噬细胞表面抗原递呈分子MHCⅡ、CD40表达的变化及巨噬细胞吞噬功能的改变,以及氢化可的松琥珀酸钠和复方甘草酸苷对AIH模型小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响并研究其意义,从而探讨AIH的发病机制及复方甘草酸苷对于AIH治疗作用的免疫学机制,为AIH的治疗以及复方甘草酸苷的应用开辟新的前景。 方法：(1)造模：4-6周龄的雌性C57BL/6小鼠,以同种系S-100肝抗原与弗氏完全佐剂充分乳化后分别于第一天及第7天两次予小鼠腹腔注射建立AIH的动物模型,对照组采用同剂量的生理盐水与弗氏佐剂的混合液,并于免疫后第4周末处死小鼠；(2)提取、分离、培养小鼠腹腔巨噬细胞：提取后置培养箱培养后,用不含小牛血清的RPMI-1640培养液漂洗,然后加含小牛血清的RPMI-1640培养液在培养箱中继续培养以备用；(3)配制药物及体外细胞加药：含小牛血清的RPMI-1640培养液分别将氢化可的松琥珀酸钠和复方甘草酸苷浓度分别调配至1mg/m1,对照组仅加入培养液,培养箱中培养30min,然后加入异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate, FITC)标记的大肠杆菌(escherichia coli, E.coli)共孵育；(4)巨噬细胞表面抗原递呈分子测定：加入不含FITC标记E.coli共孵育,用流式细胞仪测定抗原呈递分子MHCⅡ及其协同共刺激分子CD40在正常小鼠及AIH模型小鼠巨噬细胞表面的表达情况,从而判断巨噬细胞的抗原递呈能力；(5)AIH小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的测定：小鼠腹腔巨噬细胞与FITC标记的E.coli共孵育1小时,用荧光显微镜检测吞噬细菌的细胞数量和吞噬细菌的总数,并用流式细胞仪检测验证吞噬细菌的细胞数量,分析AIH加药组与未加药组和对照组巨噬细胞吞噬功能的差异。 结果：(1)流式细胞术检测AIH模型小鼠腹腔巨噬细胞表面抗原提呈分子MHCⅡ表达较对照组明显减低,(对照组VS AIH模型组为：0.762±0.049vs.0.362±0.035,P=0.000),两组比较差异有统计学意义；AIH模型小鼠腹腔巨噬细胞表面抗原提呈分子CD40的表达也显著低于对照组,(对照组VS.AIH模型组为：0.885±0.025vs.0.409±0.018,P=0.000),两组比较差异有统计学意义；(2)荧光显微镜检观察AIH模型小鼠腹腔巨噬细胞吞噬率及吞噬指数显著低于对照组(吞噬率：0.208±0.046vs.0.465±0.081,P=0.000；吞噬指数：0.390±0.105vs.0.848±0.091,P=0.000)；氢化可的松琥珀酸钠能提高AIH模型小鼠腹腔巨噬细胞吞噬率及吞噬指数(吞噬率：0.208±0.046vs.0.428±0.073,吞噬指数：0.390±0.105vs.0.798±0.065),复方甘草酸苷也使AIH腹腔巨噬细胞吞噬率及吞噬指数明显升高(吞噬率：0.178±0.039vs.0.375±0.094,吞噬指数：0.353±0.078vs.0.702±0.084),与AIH小鼠未加药腹腔巨噬细胞吞噬率及吞噬指数比较均具有统计学差异；(3)利用流式细胞仪验证对照组小鼠、AIH小鼠腹腔巨噬细胞未加药组及加氢化可的松琥珀酸钠组、复方甘草酸苷组的吞噬率(分别为：0.368±0.067,0.184±0.020,0.351±0.047,0.342±0.020),结果进一步验证了荧光显微镜实验结果,即AIH模型小鼠腹腔巨噬细胞吞噬率显著降低,氢化可的松琥珀酸钠和复方甘草酸苷均能提高AIH模型小鼠腹腔巨噬细胞吞噬率。 结论：①AIH小鼠腹腔巨噬细胞表面抗原递呈分子MHCⅡ、CD40表达减低,巨噬细胞抗原递呈功能减低,可能是AIH发病的重要一环。②AIH小鼠腹腔巨噬细胞吞噬率及吞噬指数也显著低于对照组,氢化可的松琥珀酸钠处理后的AIH小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬率及吞噬指数显著提高,对研究AIH的发病机制具有重要意义。③复方甘草酸苷也能显著提高AIH小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬率及吞噬指数,其可能为AIH的治疗提供一个崭新的应用前景。
【关键词】：自身免疫性肝炎 巨噬细胞 抗原递呈 甘草酸苷 吞噬功能 氢化可的松
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R575.1
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• ~.略语/符号说明10-12
• 前言12-16
• 研究现状、成果12-15
• 研究目的、方法15-16
• 一、AIH小鼠腹腔巨噬细胞表面MHCⅡ、CD40分子的表达16-24
• 1.1 实验对象和方法16-17
• 1.1.1 实验对象及主要试剂16
• 1.1.2 实验方法16-17
• 1.1.3 统计学方法17
• 1.2 实验结果17-20
• 1.2.1 小鼠腹腔巨噬细胞表面MHCⅡ分子的表达17-19
• 1.2.2 小鼠腹腔巨噬细胞表面CD40分子的表达19-20
• 1.3 讨论20-23
• 1.4 小结23-24
• 二、氢化可的松琥珀酸钠对AIH小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响24-33
• 2.1. 实验对象和方法24-25
• 2.1.1 实验对象和分组24
• 2.1.2 实验方法24-25
• 2.1.3 统计学方法25
• 2.2 实验结果25-29
• 2.3 讨论29-31
• 2.4 小结31-33
• 三、复方甘草酸苷对AIH小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响33-40
• 3.1. 实验对象和分组33-34
• 3.1.1 主要试剂33
• 3.1.2 实验方法33-34
• 3.1.3 统计学方法34
• 3.2 实验结果34-37
• 3.3 讨论37-39
• 3.4 小结39-40
• 结论40-41
• 参考文献41-46
• 发表论文和参加科研情况说明46-47
• 综述47-54
• 综述参考文献50-54
• 致谢54

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 张明发;沈雅琴;;甘草酸及其苷元甘草次酸的糖皮质激素样作用[J];现代药物与临床;2011年01期

2 王绮夏;邱德凯;马雄;;2010年美国肝病学会自身免疫性肝炎指南解读[J];中国肝脏病杂志(电子版);2011年03期

3 李蕴铷;王文冰;张黎颖;欧蔚妮;谢雯;魏来;;甘草酸类药物治疗自身免疫性肝炎疗效分析[J];临床肝胆病杂志;2007年02期

4 金建军,王建军,夏德全,周康,胡德昌;甘草酸二铵对慢活肝的疗效及免疫调节作用[J];洛阳医专学报;1995年02期

5 王英杰;范慧英;路云环;;复方甘草酸苷对银屑病患者T细胞免疫功能的影响[J];中国麻风皮肤病杂志;2007年06期

6 贾继东;段维佳;;自身免疫性肝病的诊治进展[J];中国继续医学教育;2010年03期

7 孙泉红,彭景ii;MHC II类分子表达调控的研究进展[J];生理科学进展;2004年01期

8 朱晓红;羌韧;;甘草酸苷与熊去氧胆酸在自身免疫性肝炎及原发性胆汁性肝硬化治疗中的应用[J];齐齐哈尔医学院学报;2012年22期

9 李新芳,孟富敏,潘福生,林卫,兰中芬,王风莲,骆勤,王越;18β—甘草次酸钠对炎症和免疫功能的影响[J];中国药理学通报;1990年02期

10 刘震霞;刘洋;刘翠英;;甘草酸苷制剂联合熊去氧胆酸治疗自身免疫性肝炎及原发性胆汁性肝硬化的临床观察[J];中国医药导报;2011年20期

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本文编号：266096