凋亡调控蛋白Bcl-2、Bax与非酒精性脂肪性肝病的关系及药物干预研究

发布时间：2020-05-15 08:41

【摘要】： 目的：非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)是以甘油三酯在肝内过度贮积而引起的临床病理综合征,其范畴包括单纯性脂肪肝(NASFL)、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)和NASH相关性肝硬化。目前非酒精性脂肪肝的发病机制尚不明确,以Day等提出的“二次打击”学说得到普遍公认。近年来随着对细胞凋亡的研究,不断有证据表明：在NAFLD中肝细胞凋亡可能是单纯非酒精性脂肪肝发展为非酒精性脂肪性肝炎(NASH)“二次打击”理论的关键步骤,也是该过程的重要标志,与炎症程度和纤维化进展相关。在细胞凋亡的两个进化保守的信号转导途径中,Bcl-2家族成员的构成比例是凋亡调控的关键因素,尤其这一家族的两个代表性成员Bcl-2和Bax是Bcl-2基因家族中分别抑制和促进肝细胞凋亡的结构相似、作用相反的一对胞内蛋白质,其比值直接决定肝细胞接受死亡信息后,细胞是走向生存还是死亡的命运。本实验采用高脂胆固醇饮食建立非酒精性脂肪肝大鼠模型,观察大鼠肝组织中凋亡调控蛋白Bcl-2、Bax的活性和基因表达情况,对Bcl-2、Bax在NAFLD发病机理中的作用进行初步探讨,同时观察降脂益肝冲剂对肝组织Bcl-2 Bax基因表达的影响,探讨其可能的分子治疗机制,为临床应用提供理论依据。方法：1.动物模型的建立及标本的采集：70只雄性Wistar大鼠正常喂养一周后,随机分为正常对照组(N组)：给予正常饲料；模型对照组(M组),用药组(D组)：给予高脂饲料(85%普通饲料,13%的猪油和2%的胆固醇),实验设4、8、12周三个时相点,相对应的组别分别为N1、N2、N3,M1、M2、M3,D组,每组各10只。于实验第8周末,D组开始给予降脂益肝冲剂1ml／100g,以0.8g/ml的浓度溶解灌胃,每日两次,持续4W。同时M组和N组分别给予等量的生活饮用水灌胃。分阶段处死各组大鼠,自腹主动脉采血,迅速取出肝脏,按常规制备血清及肝组织切片,并留取少量肝组织于-70℃低温保存。 2.检测指标：测体重、体长、肝湿重,并计算肝指数(肝湿重／体重×100%)、Lee's指数(体重0.33/体长×1000)等体质指标；全自动生化分析仪测定丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、血脂含量；光镜下评估肝脂肪变性、炎症活动度和纤维化程度；蛋白印迹法(Western Blot)检测肝组织中凋亡调控蛋白Bcl-2、Bax的表达。结果：1.N组大鼠肝小叶结构完整,肝索围绕中央静脉呈放射状排列,细胞呈多边形,大小一致；各项生化指标均在正常范围；肝组织内可见凋亡调控蛋白Bcl-2、Bax的表达,且二者比值保持平衡。 2.4周末,M1组大鼠出现轻度脂肪变,无炎性细胞浸润,无纤维化；血清转氨酶水平、血脂含量较N1组升高；肝组织凋亡调控蛋白Bcl-2表达下降,Bax表达增多,二者比值下降(P0.01)。 3.8周末,M2组大鼠肝组织呈单纯性脂肪肝改变,无炎性细胞浸润,纤维化S1期；血清转氨酶水平、血脂含量较N2组明显升高；肝组织凋亡调控蛋白Bcl-2表达较N2组显著下降,Bax表达增多,二者比值下降(P0.01)。 4.12周末,M3组大鼠肝细胞呈弥漫性脂肪变,伴大量炎性细胞浸润,肝纤维化S2期；血清转氨酶水平、血脂含量较N3组显著升高；肝组织凋亡调控蛋白Bcl-2表达较N3组显著下降,Bax表达增多,二者比值更低(P0.01)。D组大鼠肝脂变程度、炎症活动度、纤维化较M3组明显减轻；血清学各项指标均有显著改善；(P0.01或P0.05)；肝组织Bcl-2表达较M3组明显增多,Bax表达减少,二者比值升高,但仍较N3组低(P均0.01)。结论：1.高脂高胆固醇饮食可以成功复制NAFLD大鼠模型,脂质代谢紊乱、炎症损伤以及肝细胞凋亡与NAFLD的发生密切相关。 2.正常大鼠肝脏表达一定量的Bcl-2、Bax蛋白,且二者比值Bcl-2、Bax保持平衡,NAFLD大鼠肝脏Bcl-2蛋白表达下调,Bax蛋白表达增多,Bcl-2、Bax降低,且随造模时间延长Bcl-2、Bax两者比值显著下降。 3.降脂益肝冲剂对NAFLD具有良好的防治效果,其发挥治疗作用可能与上调肝脏Bcl-2蛋白表达,减少Bax蛋白,纠正二者平衡失调有关。
【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R575.5

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