四氯化碳诱导大鼠肝纤维化不同阶段ROCK1表达的实验性研究

发布时间：2020-05-20 06:41

【摘要】： 目的:肝纤维化是多种慢性肝损伤的共同后果,进一步则可发展为肝硬化甚至肝癌,是一类世界性的严重危害人类健康的主要疾病。肝星状细胞(hepatic stellate cell ,HSC)是肝纤维化发生的核心环节,活化的HSC通过旁分泌与自分泌作用合成分泌多种细胞外基质(extracellular matrixes, ECM),同时合成、释放大量金属蛋白酶组织抑制物(tissue inhibitors of metalloproteinases ,TIMPs),抑制胶原酶、明胶酶等基质金属蛋白酶活性,减少ECM降解,导致ECM合成大于降解,最终过量积聚在肝内形成肝纤维化。这一复杂的病理过程是多条细胞信号传导通路和一系列细胞信息分子网络共同控制的结果,转化生长因子-β(transforming growth factor beta, TGF-β)等细胞因子分别通过TGFβ-Smad通路、MAPK (丝裂原激活的蛋白激酶,mitogen activated protein kinase)通路、PI-3K通路等众多细胞信号通路网络交互影响,共同介导肝纤维化复杂的病理生理变化。Rho-ROCK信号通路是体内普遍存在的一条信号转导通路,它通过调节细胞肌动蛋白骨架的聚合状态,参与调控了细胞形态特征、细胞粘附与迁移、细胞增殖与凋亡、基因转录等生物学行为,引起细胞收缩、游走粘附、生长分裂、应力纤维产生及平滑肌运动、胶原合成等生物效应,与哮喘、高血压、动脉硬化、肿瘤浸润转移以及多种器官纤维化等疾病密切相关。目前关于Rho-ROCK信号通路在肝纤维化时的变化规律及其与肝纤维化的关系研究尚不多,通过研究ROCK1蛋白在实验性肝纤维化过程的不同阶段的表达情况,进一步证实Rho-ROCK信号通路在肝纤维化及肝硬化中的作用,为以后不断开发诊断及治疗肝纤维化的新方法带来新的希望。方法:①实验动物:健康♂Wistar大鼠随机分为2组:包括正常对照组及模型组。正常对照组即正常饲养,模型组即腹腔注射四氯化碳,2次/周,剂量2ml/Kg体重。分别在腹腔注射四氯化碳后3天、6天、2周、4周、6周、8周时间点随机选取6只大鼠处死,取部分肝组织以中性甲醛溶液固定、石蜡包埋,多聚赖氨酸涂布的载玻片制作4μm组织切片,用于HE染色及免疫组化;另取部分肝组织迅速液氮冻存,用于PCR检测。 ②检测指标:HE染色观察肝脏组织的病理学变化,用以观察肝纤维化程度。利用荧光定量PCR方法检测不同时间段ROCK1基因mRNA转录水平的变化情况。免疫组化分别检测ROCK1、胶原Ⅰ、胶原Ⅲ的组织定位及表达情况。 ③数据统计与分析:检测值以均数±标准差表示,采用SPSS10.0统计软件进行方差分析,P0.05为差异有统计学意义。结果: 1 HE染色:在实验早期,大鼠肝脏肝血窦扩张充血,炎细胞浸润伴肝细胞灶性坏死,中期时肝细胞肿胀变性,空泡样改变,汇管区纤维组织增生,实验后期肝细胞大量变性坏死,间质纤维组织增生,纤维间隔形成,后期假小叶形成,胶原纤维沉积明显增加,肝实质结构紊乱。 2荧光定量PCR显示:随着肝纤维化的进展,Rock1基因mRNA转录水平逐渐升高,其△△CT值逐渐变大,至第8周时趋于平稳。 3免疫组化显示:ROCK1、胶原Ⅰ、胶原Ⅲ阳性表达面积逐渐增多,ROCK1分别与胶原Ⅰ(r=0.970)和胶原Ⅲ( r=0.870)呈显著正相关。结论:ROCK1在四氯化碳诱导大鼠肝纤维的过程中,其组织表达水平逐渐升高,与组织内胶原的变化成正相关。随着肝纤维化的进展,ROCK1基因mRNA转录水平亦逐渐升高,提示其功能也是增强的,说明其在肝纤维化的发生、发展过程中可能起到了重要作用,间接说明了Rho/ Rho激酶信号通路可能是肝纤维化发生的另一条重要信号通路。
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R575.2

【参考文献】