蛋白C途径在溃疡性结肠炎发病中的作用

发布时间：2020-05-23 15:13

【摘要】：溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)是炎症性肠病(inflammatory bowel disease,IBD)的一个主要类型,是一种主要累及大肠的局部性和全身性慢性炎症。该患者的血栓栓塞并发症风险增加,影响其生存率和死亡率。1936年Bargen和Barkesher首先报道了溃疡性结肠炎患者合并动静脉血栓栓塞并发症。在梅奥诊所的大量调查中Talbot等人发现约1.3%的IBD病人合并血栓栓塞并发症,而其他研究报道的发生率更高,达到7%。一项来自于尸检的结果发现UC患者的静脉血栓栓塞并发症能高达39%,说明大部分的栓塞发生并没有临床表现或被临床忽视了。血栓栓塞并发症是这些患者的第三大死亡原因(10%)。这种高凝状态是伴随炎症活动而出现,炎症控制而缓解,血栓可使肠道黏膜缺血坏死,严重致溃疡形成,进而加重UC患者结肠、直肠黏膜病变。因此,血栓栓塞并发症已成为UC病情恶化的主要原因,严重影响UC患者的生存质量,危及其生命。UC是一种复杂的疾病,涉及疾病发生和进展阶段黏膜免疫和胃肠道生理学改变。近期研究表明:UC导致的病理异常不仅仅局限于抗原呈递细胞(例如树突细胞)的功能障碍或CD4+T细胞(类似牛皮癣中的T细胞紊乱)的过度活化,涉及一些非免疫细胞,如微血管内皮细胞,调节炎症细胞的募集,组织损伤(例如血管性水肿)和炎症介质的产生。UC患者病情发展中存在着炎症-凝血两大系统间的互动,主要表现为微血栓形成及微循环障碍。血管内皮已经被证明是其相互作用的界面,而蛋白C(protein C,PC)途径是血管内皮功能重要的介导者。PC途径是天然抗凝血系统,包括两种维生素K依赖性血浆蛋白,酶原PC和辅因子蛋白S(protein S,PS),以及膜受体,血栓调节蛋白(thrombomodulin,TM)和内皮细胞蛋白C受体(endothelial cell protein C receptor,EPCR)。其抗凝途径主要通过灭活凝血因子Ⅴ和Ⅷ,限制凝血因子Ⅹa与血小板结合以及增强纤维蛋白的溶解来进行,直接影响凝血-抗凝机制的动态平衡。UC中血栓栓塞风险增加可能主要是凝血系统中炎症途径(如细胞和细胞因子)的活化产生的生物学和生物化学效应。肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-α,TNF-α)主要由巨噬细胞、T细胞和NK细胞产生,与局部炎症相关,已证实其在炎症诱导凝血激活过程中具有重要核心地位。将TNF-α注入人体后检测多种凝血指标,结果显示凝血途径被激活。白介素-6(interleukin-6,IL-6)也可诱导凝血系统激活,应用抗IL-6可阻止系统感染导致的凝血异常。已经证明TNF-α和IL-6在白细胞的细胞表面上诱导组织因子(tissue factor,TF)产生,推测细胞因子是通过TF的表达来促进高凝状态的形成。有研究表明TNF-α、IL-6等炎性细胞因子可能通过刺激结肠微血管内皮细胞改变PC途径。目的的::本文旨在研究UC患者血液高凝状态的形成机制。UC发病过程中炎症因子的激活是否会导致PC途径的抑制及作用的失活,PC途径的抑制水平是否与UC的严重程度具有相关性。方法法::1收集确诊为UC活动期患者30例作为实验组,并按照改良Mayo评分将其分为轻度、中度、重度三组,轻度组10例,中度组8例,重度组12例。结肠息肉患者11例作为对照组。2用ELISA法测定血浆TNF-α、IL-6水平,发色底物法测定血浆PC、PS活性,经结肠镜下取直-乙交界处结肠黏膜2块,采用HE染色显微镜下观察结肠黏膜组织病理学表现,免疫组织化学法测定结肠TM、EPCR表达。应用SPSS 21.0统计软件对实验数据进行统计分析,P0.05差别有统计学意义。结果果::1血浆TNF-α、IL-6水平ELISA结果显示:与对照组比较,UC组患者血浆TNF-α、IL-6水平明显升高,TNF-α水平统计学分析为重度组(373.695±23.651)pg/m L中度组(228.147±13.340)pg/m L轻度组(112.209±10.182)pg/m L对照组(33.179±9.811)pg/m L,任意两组比较P0.05,差别有统计学意义;IL-6水平统计学分析为重度组(325.801±17.011)pg/m L中度组(214.022±20.274)pg/m L轻度组(111.698±12.498)pg/m L对照组(35.499±8.275)pg/m L,任意两组比较P0.05,差别有统计学意义;2血浆PC、PS活性发色底物法结果显示:与对照组比较,UC组患者血浆PC、PS活性水平明显降低,PC活性统计学分析对照组(110.55±15.845)%轻度组(66.20±7.510)%中度组(52.25±6.628)%重度组(36.42±4.772)%,任意两组比较P0.05,差别有统计学意义;PS活性统计学分析对照组(111.82±15.760)%轻度组(65.70±9.117)%中度组(50.75±5.701)%重度组(34.58±5.368)%,任意两组比较P0.05,差别有统计学意义;3血浆PC活性与炎症程度相关性分析将血浆TNF-α水平作为自变量,将血浆PC活性作为应变量,进行直线相关分析,结果显示,UC血浆PC活性与血浆TNF-α水平呈负相关(r=-0.934,P0.05);4 HE染色结果细胞核为紫蓝色,细胞浆、胶原纤维及基底膜为粉红色。对照组结肠黏膜上皮结构完整连续,腺体细胞排列整齐,杯状细胞数量较多,固有层可见少量炎性细胞浸润;UC各组出现不同程度的组织黏膜损伤,黏膜下充血、水肿,隐窝结构紊乱、破坏,隐窝内及隐窝上皮可见大量中性粒细胞浸润,杯状细胞减少,潘氏细胞化生,固有层内有大量炎性细胞浸润,包括中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、单核细胞、淋巴细胞、浆细胞等。严重者可出现粘膜上皮脱落;5结肠组织TM、EPCR表达免疫组化结果显示:对照组结肠黏膜组织中TM及EPCR呈深棕色表达,主要位于黏膜及黏膜下层微血管内皮细胞,而UC组呈棕黄色或浅黄色表达,且表达量较对照组明显减少。统计学分析TM表达的平均光密度值(optical density,OD)为重度组(0.0834±0.0178)中度组(0.1466±0.0067)轻度组(0.2121±0.0160)对照组(0.3246±0.0145),任意两组比较P0.05,差别有统计学意义;统计学分析EPCR表达的OD值为重度组(0.0888±0.0111)中度组(0.1438±0.0069)轻度组(0.1838±0.011)对照组(0.3615±0.0190),任意两组比较P0.05,差别有统计学意义。结论论::1 UC患者血浆TNF-α、IL-6水平明显升高,同时血浆PC、PS活性降低,结肠组织TM、EPCR蛋白表达降低,提示UC时PC系统活性被抑制。2相关分析表明,UC患者血浆PC活性与结肠炎症程度呈负相关。PC途径抑制在UC的血液高凝状态中起到一定作用,且其活性水平与UC的严重程度有关。
【图文】：

结肠镜

结肠镜Fig.1colonscopyA:controlgroupB:mildUCC:moderateUCD:severeUC

黏膜,结肠,HE染色

图 2 结肠黏膜HE染色(×200)Fig.2 histopathological staining (HE) of colon mucosa (×200)A:control group B:mild UC C:moderate UC D:severe UC
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R574.62

【参考文献】