细菌PCR检测联合PCT诊断急性胰腺炎并发全身感染的研究

发布时间：2020-05-24 22:46

【摘要】：目的：探讨以16SrRNA和18SrRNA基因为基础的细菌聚合酶链反应(PCR)法诊断急性胰腺炎并发全身性感染的价值和感染的病原体的特点。探索一种迅速检测细菌感染的方法。方法：选取2009年9月～2010年12月间收住昆明医学院第一附属医院的急性胰腺炎患者98例,(女30例,男68例,年龄14-89岁),不同时期不同部位标本106份,(12份痰标本,18份腹水标本。76份血标本)。患者按中国急性胰腺炎诊治指南(2007年)诊断标准纳入。利用细菌16SrRNA基因和真菌18SrRNA的高度保守性,设计并合成通用引物,提取细(真)菌DNA进行聚合酶链反应(PCR),采用2%琼脂糖凝胶电泳(AGE)观察扩增结果,并进行PCR灵敏性和特异性试验。PCR结果与常规培养结果进行比较。用SPSS11.5 For Windows进行临床资料数据分析。结果：所有细菌PCR均得到预期约1500bp的扩增产物,该引物仅扩增细菌DNA,与病毒及人基因组DNA无交叉反应,其扩增下限为10CFU/ml大肠埃希菌。所有真菌PCR均得到预期约197bp的扩增产物,该引物仅扩增真菌DNA,与细菌及人基因组DNA无交叉反应,其扩增下限为10CFU/ml白色假丝酵母菌。106份不同类型标本中,常规培养阳性率为20.75%(22/106),其中细菌培养阳性率19.81%(21/106),真菌培养阳性率0.94%(1/106)；用PCR法检测总阳性率为32.07%(34/106),其中细菌16SrRNA基因PCR阳性率28.30%(30/106),真菌18SrRNA基因PCR阳性率3.77%(4/106)；培养和PCR一致阳性率为18.87%(20/106)。PCR法优于培养法(P0.05)。且其灵敏度为90.9%(20/22),特异度为83.33%(70/84)。只需6-8小时就可出结果,而培养方法则需3天。感染部位以腹腔最多,其次为呼吸道,再次为血液。结论：以16SrRNA和18SrRNA基因为基础的PCR法对诊断急性胰腺炎并发全身性感染有较高的快速性,敏感性及特异性。感染菌以大肠埃希菌和鲍曼不动杆菌为主。目的：检测急性胰腺炎患者血清降钙素原的表达和意义,探讨降钙素原预测急性胰腺炎继发细菌感染的临床价值。方法：选取第一部分入选急性胰腺炎患者其中的76例,(男51例,女25例,年龄14-72岁)。AP患者根据是否合并SIRS,分为非SIRS组(15例)和SIRS组,SIRS组再根据是否合并细菌感染分为SIRS组(53例)和脓毒症组(8例),分别在入院1周时采集入选患者血清,并采集临床指标CRP,用酶联免疫吸附试验方法(ELISA)测定血清PCT含量。应用SSPS11.5 for Windows软件进行统计学处理。并根据第一部分PCR检测结果比较CRP和PCT对于AP继发感染的预测能力,绘制受试者工作特征曲线(ROC曲线) 结果：血清PCT定量酶联免疫检测结果显示SIRS感染组患者PCT水平(2.68±0.84)ng/ml明显高于非SIRS组(0.97±0.56)ng/ml和SIRS组(1.39±0.58),(P0.01)ng/ml(P0.01),但三组CRP值无显著性差异(P0.05)。根据第一部分PCR检测结果,绘制受试者工作特征曲线(ROC曲线),PCT(AUC=0.737,P=0.001)对感染的预测能力明显强于CRP(AUC=0.703,P=0.004)。以2.0ng/ml为预测阈值其敏感性为74.1%,特异性为67.5%。结论：PCT是AP继发感染早期较好的预测和观察指标。
【图文】：

大肠埃希菌,细菌DNA,病毒DNA,试验结果

2、PCR特异性试验结果:本试验选用的引物仅扩增细菌DNA，与HBV-DNA和人基因组DNA无交叉反应，说明该引物扩增的产物仅针对细菌有阳性结果，具有高度特异性。见图2。图2:PCR特异性试验· DNAMarker(1OO0bP);2、5空白对照;3、人基因组DNA;4、病毒DNA;、大肠埃希菌。3、PCR灵敏性试验结果:取大肠埃希菌标准株检测PCR扩增下限为 1OCFU/ml。见图3。

PCR反应,样本

临床样本PCR反应阳性:30份
【学位授予单位】：昆明医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：R576

【参考文献】