原发性胆汁性肝硬化抗线粒体抗体阳性与阴性患者间血清差异蛋白质组学研究

发布时间：2020-05-25 00:20

【摘要】：目的运用双向荧光差异凝胶电泳(DIGE)联合串联基质辅助激光解吸飞行质谱仪(MALDI-TOF/TOF MS)筛选原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者抗线粒体抗体(AMA)阳性与阴性间血清标志物,并探讨其在PBC中的临床意义。方法收集符合AASLD标准的PBC患者30例。其中AMA+患者20例,AMA-(间接免疫荧光法测AMA及酶联免疫吸附法测AMA-M2均为阴性)患者10例。首先使用DIGE技术对筛选组(4对性别、年龄和病理分期匹配的AMA+和AMA-PBC患者)进行血清差异表达蛋白质点分析,而后使用MALDI-TOF/TOF MS对这些蛋白质进行进一步的鉴定。最后使用Western blot法在所有样本中对鉴定得到的血清淀粉样蛋白P(SAP)和玻连蛋白(VN)进行表达水平验证。结果在PBC患者中分离获得1840个蛋白质点。结果经生物信息学分析后发现,AMA+与AMA-PBC患者组间差异倍数1.5或-1.5以上的点共有28个差异点(P0.05)。其中,AMA+组患者较阴性组表达上调的蛋白质点共9个,而相对表达下调的蛋白质点共19个。经进一步鉴定最终得到9个蛋白质,SAP、血清淀粉样蛋白A、血小板碱性蛋白、维生素D结合蛋白-3、VN、α1微球蛋白、间α球蛋白抑制因子、载指蛋白A-IV和补体H相关蛋白2。Western blot验证结果显示,AMAPBC患者其VN表达水平高于AMA阳性患者(P0.01),而SAP在两者间的表达量无统计学差异(P=0.175)。结论本研究首次使用蛋白质组学技术探寻AMA+与AMA-PBC患者之间的血清标志物,研究结果表明DIGE联合MALDI-TOF/TOF MS是筛选此类血清标志物的可靠技术。VN在AMA-PBC患者中明显升高,可能是此类患者胆管损伤较AMA+患者更为严重的原因之一,仍需在临床大样本,尤其是在AMA-PBC患者中进行验证,同时分析该标志物与各种生化及免疫指标的相关性,确定其临床意义。
【学位授予单位】：北京协和医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R575.2

【参考文献】