DDR1a在小鼠实验性结肠炎中的作用及机制

发布时间：2020-05-25 10:13

【摘要】：目的:探究DDR1a在小鼠实验性结肠炎中的作用及机制。方法:慢病毒筛选:将厂家提供的3组下调DDR1a表达的慢病毒(DDR1a-homo-1400、DDR1a-homo-1403、DDR1a-homo-1733),分别转染IEC-6细胞,行Western-blot检测DDR1a蛋白表达。动物实验:将32只雌性Balb/c小鼠分为4组:正常对照组、模型组、治疗组、阴性对照组。正常对照组自由饮用蒸馏水,其余3组小鼠连续7天饮用4%DSS后继续饮用蒸馏水3天;治疗组于第4天行尾静脉注射lenti-DDR1a-sh RNA,阴性对照组经尾静脉注射scramble lenti-DDR1a-sh RNA。第11天处死小鼠,测量结肠长度,计算脾脏指数、疾病活动指数(DAI),行病理组织学评分(TDI),免疫组化及Western-blot检测各组结肠组织中DDR1a和NF-κB p65,ELISA检测各组结肠组织中IL-6、IL-8、TNF-α。细胞实验:IEC-6分为四组:正常对照组、激活组、干预组和阴性对照组;干预组和阴性对照组分别成功转染lenti-DDR1a-sh RNA和scramble lenti-DDR1a-sh RNA,除正常对照组外,其余三组细胞均需与I型胶原蛋白孵育,Western-blot检测各组细胞中DDR1a和NF-κB p65,ELISA检测各组细胞中TNF-α和IL-10。结果:1病毒筛选:Western blot结果显示转染DDR1a-homo-1403组慢病毒后,IEC-6细胞中DDR1a表达下调,差异有统计学意义(p0.05)。2动物实验:(1)DAI评分及TDI评分:与正常对照组相比,模型组DAI评分及TDI分均显著升高,而治疗组中DAI评分及TDI评分均降低,差异均有统计学意义(p0.05)。(2)免疫组化和Western-blot检测结果示:相对于正常组小鼠,模型组小鼠的DDR1a、NF-κB p65表达均明显升高,而相对于模型组,治疗组中DDR1a表达下调,同时NF-κB p65表达降低,上述差异均有统计学意义(p0.05)。(3)ELISA结果示:相对于正常对照组,模型组肠组织中TNF-α、IL-6、IL-8均高于正常组;而相对于模型组,治疗组中上述细胞因子表达均降低,上述差异均有统计学意义(p0.05)。3细胞实验(1)Western-blot结果示:相对于正常对照组,激活组中DDR1a和NF-κB p65,表达均明显升高,而相对于激活组,干预组中DDR1a表达下调,NF-κB p65表达相应降低,上述差异均有统计学意义(p0.05)。(2)ELISA检测结果示:相对于正常对照组,激活组中TNF-α和IL-10表达升高,而相对于激活组,干预组中上述细胞因子表达降低,差异有统计学意义(p0.05)。结论1 DDR1a参与小鼠实验性结肠炎的发病;2 DDR1a可能通过活化NF-κB p65,促进炎性因子的过量释放。
【图文】：

兰州大学硕士学位论文 DDR1a 在小鼠实验性结肠炎中的作用及机制2.5 实验结果2.5.1 慢病毒侵染 IEC-6 的效果检测下调 DDR1a 表达的重组慢病毒侵染 IEC-6 细胞 72h 后，置于荧光显微镜下观察，如图 2.1。通过观察几组不同 MOI 值下重组慢病毒的侵染效果，发现当MOI=10 时，有较多细胞表达 GFP，表明有部分细胞能稳定表达目的基因片段，为进行进一步的细胞实验奠定基础。

图 2.1 IEC-6 细胞慢病毒侵染 72h 结果 ×1002.5.2 Western blot 检测重组慢病毒转染前后 DDR1a 表达调 DDR1a 表达的慢病毒成功转染 IEC-6 后，行 Western blot 检测 DDR1a况，结果示 DDR1a-homo-1043 序列慢病毒成功转染后，DDR1a 表达明显p＜0.05），DDR1a-homo-1400 及 DDR1a-homo-1733 组慢病毒转染后，DDR1a 表低，，但未达到统计学意义。结果见图 2.2 和图 2.3。
【学位授予单位】：兰州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R574.62

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本文编号：2679997