HBV准种异质性在HBV母婴宫内传播中作用的研究

发布时间：2017-03-26 03:01

  本文关键词：HBV准种异质性在HBV母婴宫内传播中作用的研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：背景与目的 HBV感染是一个全球性的健康问题，经过20年的免疫接种，，15岁以下孩子中的HBsAg的携带率显著下降（自10%下降至0.7%），然而，宫内传播不能被HBV免疫接种阻断，通过这种途径感染的新生儿90%成为慢性携带病毒者，是造成免疫失败的主要原因，其中有10~25%发展为肝硬化及肝细胞癌。女性患者可通过妊娠将病毒再传递给她们的下一代。HBV宫内传播的途径主要有胎盘途径、外周血单核细胞（peripheral blood mononuclear cells,PBMCs）途径及经生殖细胞的传播。其中胎盘的渗漏和胎盘细胞的感染是最主要的途径，HBeAg可以经过局部的胎盘渗漏通过胎盘，随着胎盘屏障的破坏，造成母亲的血液进入到胎儿的循环中。或者通过“细胞途径”，可能促进了感染经胎盘的传播[8]。母亲HBeAg血清型阳性及高病毒载量为经胎盘HBV宫内感染明确的正相关因素。但高危因素的孕妇所生婴儿“有的呈慢性感染，有的却产生保护性抗体”，就这一现象的成因而言，病原学特征（HBV基因型、血清型、准种）及环境暴露因素、宿主遗传因素（宿主易感性、基因多态性、易感基因）可能各自均发挥了重要作用，更可能是两者交互作用的结果。 妊娠状态也改变了孕妇体内HBV的多样性、进化速率及演变方向。病毒可能在选择压力下形成免疫逃逸株，感染胎盘，突破胎盘屏障导致胎儿宫内感染。病毒在妊娠这一新环境下，不同种群中病毒株的进化模式有何特点？核苷酸多态性分布有何差异？各蛋白编码区在整体上的进化演变规律如何？是否受到正选择压力的作用？突破胎盘屏障的免疫逃逸主要与哪一个或哪几个位点有关？这些问题目的解答尚不明确。 HBV基因组包含四个开放阅读框（ORF），分别编码表面抗原（S区）、多聚酶（P区）、核心抗原（C区）以及X蛋白（X区）。病毒变异受到其自身复制特性、宿主遗传背景、免疫压力等的交互作用，由于HBV是以全长序列为遗传单位进行复制和传播，因此，母婴宫内传播逃逸株的变异必然是全基因组范围并且相互关联的。基于此，对妊娠过程中HBV各编码区（尤其是免疫原性较强的C区和S区）的监测对于认识HBV宫内传播的机制具有重要意义。 为探讨上述问题，本研究收集2对病毒高载量（HBVDNA≥10~6copy/ml）和HBsAg及HBeAg双阳性的发生母婴传播HBV宫内感染的母亲和新生儿的静脉血样，提取血清HBV DNA，采用PCR-克隆测序-种系进化分析方法，观测母婴的HBV种群之间的进化发生特点，同时以这两位母亲为传播组，同样病毒高载量和HBsAg及HBeAg双阳性的未发生宫内传播的母亲为对照组，用上述方法观察HBV准种全长序列异质性变化，分析HBV准种全长序列变异及进化规律，从而进一步探讨HBV准种异质性在宫内感染的作用。 主要结果： 一、发生宫内传播的两对母婴的HBV种群病毒株序列建立2个进化树，表现为两种特点：第一种，大部分母亲株聚集为一枝，但新生儿株与小部分母亲株聚集在另一枝，母亲株为新生儿株的起源；第二种，母亲株与新生儿株未形成总的单源群，也没形成各自的单源群，有一株新生儿的病毒株位于大部分母子序列的上游。 二、对照组和传播组各对象HBV的种系发生具有各自的特征，经“胎盘渗漏”途径宫内传播的HBV种群进化特点与未发生宫内传播的对照组的HBV种群进化特征类似。 三、传播组和对照组间种群平均遗传距离（mean distance）行两样本t检验无统计学差异（P＞0.05），但种群内部配对比较所得的遗传距离（pariwise distance）数据库之间，各样本间均存在统计学差异（P＜0.05）。 四、克隆测序出的不同的病毒株之间全基因组核苷酸分析，U1基因多态性最高，U4、M1基因多态性较高，U2、U3基因多态性近似，而M2基因多态性最低。RT区、X区及前C/C区和前S/S区均有基因多态性分布。U1全基因组的多态性均较高，其最高峰位于前S区；M1基因多态性较高，在S区（与RT区重叠，nt378-480之间）、X区和前C/C区有高峰分布，其最高峰位于前C/C区，次高峰位于S区；U2、U3、U4各区高峰分布较均匀，最高峰位于X区或前C/C区，M2全基因组核苷酸序列总体多态性不高，最高峰位于S区（与RT区重叠，nt431-619之间)。 五、在种群进化过程中，每个样本内部的各蛋白编码区的非同义替换（dN）和同义替换（dS）距离均不相同。 六、各样本均未发现正选择位点。 主要结论： 一、发生HBV宫内传播的两对母婴的HBV病毒所建立的系统进化树的特点显示，M1N1符合“胎盘渗漏”的感染模式，M2N2符合“细胞途径”的感染模式。 二、传播组与对照组之间HBV种群平均遗传距离无统计学差异，P＞0.05，但每个样本组内病毒株两两之间的遗传距离数据库行两样本t检验，则有显著性差异，P＜0.05，进一步说明HBV具有准种特性。 三、经“细胞模式”途径发生宫内传播的HBV病毒株种群，遗传距离和核苷酸多态性较小，种群内最大的核苷酸多态性区域位于与抗原和免疫逃逸有关的S基因及“a”抗原决定簇内，并有一个与免疫接种逃逸有关的热点氨基酸变异位点sT126A。说明HBV宫内感染可能与S基因及“a”抗原决定簇有关。 四、在种群进化过程中，每个样本内部的各蛋白编码区的非同义替换（dN）和同义替换（dS）距离均不相同，说明各编码区对选择压力的应答均存在差异。 五、经“细胞途径”发生宫内传播的母亲HBV准种异质性小于经“胎盘渗漏”途径发生宫内传播和未发生宫内传播的母亲HBV准种异质性。
【关键词】：乙型肝炎病毒 宫内传播 准种 系统进化
【学位授予单位】：第三军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R512.62
【目录】：

• 英文缩写词表4-6
• 英文摘要6-9
• 中文摘要9-12
• 前言12-15
• 第一部分 HBV 在宫内传播途径的分子进化特点研究15-30
• 前言15
• 材料与方法15-25
• 结果25-28
• 讨论28-30
• 第二部分 宫内传播组与对照组母亲 HBV 基因组全长序列准种特点的研究30-45
• 前言30-31
• 材料与方法31-33
• 结果33-42
• 讨论42-45
• 全文总结45-47
• 致谢47-48
• 附图48-54
• 参考文献54-58
• 文献综述 HBV 的生物学特点及母婴传播的途径和影响因素58-70
• 参考文献65-70
• 攻读硕士学位期间主要工作成绩70

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

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  本文关键词：HBV准种异质性在HBV母婴宫内传播中作用的研究，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：268146