肝细胞生长因子对高糖诱导的腹膜纤维化的影响

发布时间：2020-05-30 22:26

【摘要】： 研究背景和目的:PD是ESRD患者的主要肾替代治疗方法之一。但是长期暴露于生物不相容性的PDF中的腹膜易损伤,逐渐进展为腹膜纤维化,导致超滤失败,溶质清除障碍,影响PD疗效。高糖环境上调TGF-β_1的表达并诱导HPMCs发生EMT是腹膜纤维化启动和维持的关键过程。而目前认为HGF和TGF-β_1之间的平衡在决定损伤组织是痊愈还是纤维化起着关健的作用。众多研究表明,HGF是内在的抗纤维化因子。本研究主要探讨外源性HGF能否影响高糖环境培养下的HPMCs的TGF-β_1表达,并阻止HPMCs发生EMT,减少ECM的合成。探讨HGF对腹膜纤维化的防治作用,为保护长期PD患者的腹膜功能提供新的治疗策略。 方法:通过胰蛋白酶消化法从人大网膜组织中分离出HPMCs并进行原代培养,通过形态学和免疫组化进行腹膜间皮细胞鉴定,取第三代细胞用于实验。细胞亚融合后在无血清培养基中同步化24小时,然后在不同葡萄糖浓度环境(5.5,30,60mmol/LD-葡萄糖,54.5mmol/L甘露醇)及高糖环境中(60mmol/L D-葡萄糖)加入不同浓度的rhHGF(25,50,100ng/ml)培养48小时。ELISA方法检测细胞培养上清液TGF-β_1、FN蛋白水平,免疫组化方法检测HPMCs之α-SMA的蛋白表达,并通过IOD测定进行半定量分析。通过荧光定量PCR检测HPMCs之TGF-β_1,FN,α-SMA mRNA的表达。 结果:1、原代培养的HPMCs开始以梭形的成纤维细胞样生长,约一周后融合并表现为“铺路石”状,免疫组化显示角蛋白和波形蛋白表达阳性。2、在高糖环境培养下的HPMCs之α-SMA、TGF-β_1、FN蛋白和基因表达水平与对照组比较都明显增加(P＜0.05),并呈剂量依赖关系(P＜0.01)。甘露醇组与对照组比较无明显增加。3、HGF在蛋白和基因水平可抑制高糖诱导的HPMCs之α-SMA、TGF-β_1、FN表达(P＜0.05),并呈剂量依赖关系(P＜0.01)。 结论:1、HPMCs在高糖环境培养下,TGF-β_1的表达上调,并诱导了HPMCs的EMT,促进HPMCs合成ECM。2、外源性的HGF可抑制高糖诱导的HPMCs TGF-β_1的表达,并阻止HPMCs的EMT和减少ECM的分泌,提示HGF具有抑制腹膜纤维化的生物学功能,为临床防治PD相关的腹膜纤维化提供理论依据和新的治疗思路。
【图文】：

1.细胞生长情况原代消化下的细胞在12一36小时后逐渐贴壁并完全伸展，细胞开始以梭形的成纤维细胞样生长，细胞形态、大小不一(见图1一l)。经6一7天的培养后，细胞生长并逐步融合成单层，细胞表现为多边形的上皮细胞形态，大小形态较为一致，在倒置相差显微镜下显示呈现典型的“铺路石样”外观(见图1一2，1一3)。上述生长特点符合文献报道的腹膜间皮细胞的生长特征[9一‘0]。2.免疫组织化学染色鉴定免疫组化结果显示，培养的第二代人腹膜间皮细胞角蛋白、波形蛋白抗原表达均阳性(见图1一4，1一5)，两种染色均为胞浆着色，呈棕黄色，胞核中未见，这两种蛋白同时阳性被认为是间皮细胞的特征，排除成纤维细胞。第VIII因子相关抗原、白细胞CD45抗原表达阴性(见图1一6)

在低浓度的葡萄糖环境培养下，只有少量的HPMCs表达a一SMA，随着葡萄糖浓度的增高，a一SMA阳性HPMCs细胞数明显增多，并巨一些阳性细胞明显肥大、拉长，部分有多个细胞核(见图2一1一2一4)，通过软件测得各组表达a一SMA阳性区域IOD值显示，两个高糖组的平均IOD值较低糖对照组明显升高，并有统计学差异(P<O.01)，甘露醇组与低糖对照组比较无显著性差异(P=0.078)，而且平均IOD值与葡萄糖浓度呈剂量依赖正相关(r=0.960，P<0.01)，见表2一l。2.HGF对高糖环境培养下的班姗Cs表达Q一SMA的影响在高糖环境培养下的HPMCs加入不同浓度HoF后
【学位授予单位】：福建医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2009
【分类号】：R587.2;R572

【参考文献】

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1 凌光辉;刘伏友;彭佑铭;段绍斌;李军;陈星;;短发夹结构RNA对人腹膜间皮细胞转化生长因子-β_1表达和超微结构的影响[J];中国血液净化;2007年09期

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本文编号：2688818