性别差异对小鼠急性化学性肝损伤影响的分子机制

发布时间：2020-05-30 23:35

【摘要】：目的本课题主要研究CCl_4诱导不同性别小鼠的急性化学性肝损伤过程中,肝细胞的应激、增殖、凋亡和代谢等相关因子以及mRNA、micro RNAs、lnc RNA、circRNA的表达差异,阐明性别差异因素对小鼠急性化学性肝损伤影响的分子机制。方法健康昆明小鼠120只,雌、雄各60只,随机分组,三组雌性组(每组20只)和三组雄性组(每组20只),分组如下:正常组(normal group,NG),正常加腹腔注射橄榄油组(normal control group,NCG)和腹腔注射CCl_4组(0.1%CCl_4橄榄油溶液0.1ml/10g)(carbon tetrachloride group,CTG);腹腔注射CCl_4 24小时后,将各组小鼠进行眼球采血,离心后取血清,测定各组血清中谷丙(ALT)、谷草(AST)转氨酶的活性变化。采用颈椎脱臼处死小鼠取肝脏,并将各组均分为三份:一份固定后用于做组织细胞学分析,如下实验:苏木精-伊红(HE)染色检测各组间小鼠肝组织细胞形态损伤的差异情况;过碘酸-雪夫试剂(PAS)染色检测各组间小鼠肝组织细胞糖原的含量变化的差异情况;荧光染料(Hochest33258)荧光染色检测各组小鼠间肝细胞的凋亡差异情况;一份用于m RNA转录测序检测,进行RNA的提取及转录测序,筛选各组肝脏间的差异表达的mRNA、micro RNAs、lncRNA、circRNA及其差异基因,并用荧光定量RT-qPCR对测序结果进行验证;一份肝组织混合后研磨提取组织蛋白用于蛋白印迹检测(WB):检测应激因子HSP27、HSP70、增殖细胞核抗原PCNA、半胱蛋白酶-3 Caspase-3、Bcl-2相关X蛋白Bax、Bcl-2及代谢酶细胞色素P4502E1(CYP2E1)的表达情况。结果:注射CCl_4 24小时后,雌性和雄性小鼠肝损伤情况:1.血清中AST、ALT酶活性水平,雌性比雄性显著升高(P0.01)。2.苏木精-伊红(HE)染色情况:肝细胞坏死程度,雌性组小鼠显著高于雄性组(P0.01)。3.过碘酸雪夫试剂(PAS)染色结果:雄性组小鼠肝脏细胞中糖原的含量高于雌性组(P0.05)。4.Hoechst33258荧光染色情况:结果显示雌性组比雄性组小鼠肝细胞凋亡的数目显著增多(P0.01)。5.RNA转录测序结果:雌性小鼠与雄性小鼠mRNA、micro RNAs、lncRNA、circRNA均存在显著差异表达,挑选差异表达基因进行荧光定量PCR验证,结果与转录测序结果基本一致。6.蛋白印迹结果:雄性组比雌性组小鼠肝细胞内HSP27,HSP70,PCNA和Bcl-2的蛋白表达量高(P0.05或P0.01),而Bax,Caspase-3,CYP2E1的蛋白表达量低(P0.05或P0.01)。结论小鼠急性化学性肝损伤在糖原储备、RNA表达等方面存在明显的性别差异。这种差异主要通过基因的差异转录mRNA、mi RNA、lncRNA及circ RNA后,翻译产生调节肝细胞应激、增殖、凋亡的相关蛋白的差异表达来完成。
【学位授予单位】：河南科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R575

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