溃疡性结肠炎小鼠中性粒细胞弹性蛋白酶的表达及其抑制剂的干预效应

发布时间：2020-06-05 02:44

【摘要】：溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)是一种以腹痛、腹泻、黏液脓血便为特征的结肠直肠慢性非特异性炎症。过去认为欧美UC多见,亚非少见;1978年以来流行病学资料显示,我国UC的发病率和患病率呈逐年增加趋势,病因及发病机制复杂,治疗困难。大量研究表明免疫反应异常参与了UC的发病,其中对淋巴细胞或抗原递呈细胞的作用研究颇多,而中性粒细胞在UC致病中的作用鲜有报道。中性粒细胞弹性蛋白酶(neutrophil elastase,NE)是中性粒细胞活化并释放的产物,主要参与组织损伤,在急性肺损伤、肺气肿、关节炎等疾病中的作用已有报道。本课题旨在观察NE抑制剂对BALB/c小鼠UC的作用,探讨NE在小鼠UC发病中的作用。 [目的] 1.探讨UC小鼠血浆及结肠组织中NE的表达。 2.探讨NE抑制剂干预对小鼠UC的预防和治疗作用。 [方法] 1.建立UC小鼠模型、分组及干预:52只健康雄性BALB/c小鼠随机分为4组:①正常对照组(N组,n=12);②实验组(UC组,n = 12);③实验组+ONO-5046低剂量干预(UC+L组,n = 14);④实验组+ONO-5046高剂量干预(UC+H组,n = 14)。UC组:予5% DSS溶液自由饮用建立UC小鼠模型,N组:自由饮用蒸馏水9天。干预:UC组:实验第0天起腹腔注射PBS 0.2ml,bid×9天,实验第1天起予DSS饮用6天、再予蒸馏水饮用2天。UC+L和UC+H组:实验第0天起腹腔注射ONO-5046溶液0.2ml(ONO-5046 25mg/kg或50mg/kg,溶于0.2ml PBS),bid×9天,余处理同UC组。分别于实验的第5d及第9d分批处死各组小鼠。 2.观察指标:包括小鼠体重、粪便性状、便血、疾病活动指数、结肠组织学评分。 3.留取所有小鼠血浆及结肠组织标本,ELISA法分别检测小鼠血浆及结肠组织培养上清液中NE的浓度及含量,Western Blot法测定各结肠组织中NE的蛋白表达。 [结果] 1.实验第7d(饮DSS 6d),与N组比较,UC组小鼠体重下降明显(P0.01),粪便性状评分、便血评分及疾病活动指数评分显著升高(P0.001)。 2.体重:与N组比较,实验第5d(饮DSS 4d),各组小鼠体重均降低(P0.05);第9d(停用DSS 2d),UC+H组与N组无差异(P0.05)。与UC组比较,UC+L组体重略增加(P0.05),UC+H组体重明显增加(P0.05),UC+H组高于UC+L组(P0.05)。 3.粪便性状评分:与N组比较,实验第5d,各组评分均增高(P0.05);第9d,各组评分均显著增高(P0.01)。与UC组比较,UC+L组评分稍下降(P0.05),实验第5d,UC+H组下降(P0.05),低于UC+L组(P0.05),第9d,UC+H组显著下降(P0.01),明显低于UC+L组(P0.01)。 4.便血评分:与N组比较,实验第5d,各组评分无差异(P0.05);第9d,UC组评分显著升高(P0.001)。与UC组比较,UC+L组评分稍下降(P0.05),UC+H组显著下降(P0.01),UC+H组低于UC+L组(P0.05),均高于N组(P0.05)。 5.疾病活动指数评分:与N组比较,实验第5d,各组评分均增高(P0.01);第9d,各组评分均显著增高(P0.05)。与UC组比较,UC+L组评分稍下降(P0.05),实验第5d,UC+H组下降(P0.05),低于UC+L组(P0.05),第9d,UC+H组显著下降(P0.01),明显低于UC+L组(P0.01)。 6.结肠组织学评分:与N组比较,实验第5d、第9d,UC组明显升高(P0.01),第9d较第5d更加升高(P0.05)。与UC组比较,UC+L组评分稍降低(P0.05),UC+H组明显降低(P0.01),且UC+H组低于UC+L组(P0.01),仍均高于N组(P0.01)。 7.血浆NE浓度:与N组相比,实验第5d、第9d,UC组NE明显升高(P0.01),第9d较第5d进一步升高(P0.05)。与UC组相比,UC+L组稍降低(P0.05),UC+H组显著降低(P0.01),UC+H组低于UC+L组(P0.01);第5d,均高于N组(P0.01),第9d,UC+H组与N组无差异(P0.05)。 8.结肠组织培养上清NE含量:与N组相比,实验第5d、第9d,UC组显著增加(P0.01),第9d较第5d进一步增加(P0.01)。与UC组相比,UC+L组NE含量稍下降(P0.05),UC+H组显著下降(P0.01),UC+H组低于UC+L组(P0.01),仍均高于N组(P0.01)。 9.远端结肠组织中NE蛋白表达:与N组相比,实验第5d、第9d,UC组显著增加(P0.01),第9d较第5d进一步增加(P0.05)。与UC组相比,UC+L组NE含量稍下降(P0.05),UC+H组显著下降(P0.01),UC+H组低于UC+L组(P0.01),仍均高于N组(P0.01)。 10.血浆NE浓度、远端结肠NE蛋白表达与DAI及组织学评分的关系:实验第5d及第9d,UC组小鼠血浆NE浓度和远端结肠NE蛋白表达与DAI评分和组织学评分均有相关性。 [结论] 1. DSS饮用6天时UC组小鼠体重明显下降、粪便性状评分、便血评分明显升高,类似人类UC临床特征,说明UC小鼠已成模。 2. UC小鼠血浆及结肠NE表达明显增高,且与DAI评分和组织学评分均有相关性,提示NE可能参与UC的发病。 3. NE抑制剂干预UC小鼠,可使便血、体重下降等症状改善,使结肠炎症好转,且该干预作用呈剂量相关性,提示早期足量应用NE抑制剂,对UC的临床过程有一定的预防及治疗作用。
【图文】：

对照组,停用,粪便,小鼠

粪便性状：与对照组比较，UC 组小鼠实验第 4d（饮 DSS 水 3d）粪便评分升高（P<0.05），第 5-7d 进一步升高（P<0.001），第 8-9d（停用 DS评分呈下降趋势，但仍显著高于对照组（P<0.001）；且 UC 组小鼠实验粪便性状评分显著高于实验第 5d（P<0.01）（表 1.5，图 1.2）。表 1.5 小鼠粪便性状评分0 1 2 3 4 5 6 7 8 90 0 0.17±0.110.33±0.220.50±0.270.50±0.170.50±0.210.67±0.220.67±0.210.5±00 0 0.550.831.17a2.17b2.83b3.83b3.5b3.1图 1.1 小鼠体重变化(%)注：aP<0.05 vs 对照组；bP<0.01 vs 对照组

对照组,小鼠,停用

3. 便血：与对照组比较，UC 组便血评分随 DSS 饮用时间的延长逐渐升高，在实验第 6-7d（饮 DSS 水 5d）有显著性差异（P<0.001），第 8-9d（停用 DS水）便血评分出现下降趋势，，但仍显著高于对照组（P<0.001）；且 UC 组小鼠实验第 9d 便血评分显著高于实验第 5d（P<0.001）（表 1.6，图 1.3）。表 1.6 小鼠便血评分0 1 2 3 4 5 6 7 8 9对照组0 0 0.13±0.120.09±0.210.13±0.170.33±0.220.33±0.120.50±0.250.33±0.200.330.1UC0 0 0.33±0.50±0.67±0.83±1.83±3.17±2.50±2.17图 1.2 小鼠粪便性状评分注：aP<0.05 vs 对照组；bP<0.001 vs 对照组；cP<0.01 vs UC 组第 5d
【学位授予单位】：南京医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2009
【分类号】：R574.62

【参考文献】