【摘要】：背景 肝纤维化是肝炎发展至肝硬化和肝癌的中间过程,在肝纤维化发生的过程中，，肝星状细胞激活为肌成纤维细胞也是关键的环节。肝星状细胞受到生长因子、细胞因子、趋化因子、氧化应激产物和其它细胞因子的协同作用，构成了一个以介质-靶点-细胞外基质间相互作用网络。乌司他丁是一种胰蛋白酶抑制剂，具有迅速而且高效的抑酶作用，具有抑制溶酶体酶等多种水解酶的过度释放，清除氧自由基、稳定细胞器膜，抑制心肌细胞抑制因子、改善微循环等多种作用。目前乌司他丁对改善肝纤维化的作用尚未完全明确。 目的 建立大鼠肝纤维化模型，并通过该模型探讨乌司他丁对肝纤维化的影响效果。 方法 1.预实验建模：按照诱导药物的不同分设对照组、四氯化碳（CCl4）组、硫代乙酰胺（TAA）组和猪血清组；测定大鼠血清中天冬氨酸氨基转移酶（AST）、谷氨酸氨基转移酶（ALT）、丙二醛（MDA）、透明质酸（HA）、超氧化物歧化酶（SOD）。取各组大鼠肝组织行HE染色，根据HE染色结果对各组大鼠不同时间点肝纤维化程度进行分级和评分,判定肝纤维化造模效果。 2.乌司他丁干预肝纤维化大鼠实验：正常大鼠-A组作为对照组，TAA诱导的肝纤维化模型分为两组，模型鼠+生理盐水-B组、模型鼠+乌司他丁-C组,对比两组大鼠血清中的AST、ALT、SOD、HA、MDA、LN变化；检测肝脏瞬时弹性超声，观察大鼠肝脏HE、MASSON和天狼星红染色；分析大鼠肝组织中β1型转化生长因子（TGF-β1）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（caspase-3）蛋白含量。 结果 预实验建模： 1.三组大鼠随着实验时间的增加，体重增加不明显。 2.血清指标变化：在3个时间点，CCl4组和猪血清组ALT未见明显升高（P0.05），而AST浓度均显著高于对照组（P0.05）。CCl4组AST浓度在第3周显著升高，而在第6、9周时，反而有所好转。TAA组、猪血清组三个时间点HA和AST浓度升高显著。三个造模组MDA浓度在三个时间点均有所升高，TAA组增加最明显。 3.肝纤维化分级：在三个时间点，造模三组与对照组相比，肝纤维化分级(SSS半定量计分系统)差异均具有统计学意义（P0.05）。第9周时，TAA组的平均SSS计分2.37±0.16高于其余3组。CCl4组的SSS评分为2.21±0.24，与猪血清组相比，差异具有统计学意义（P0.05）。 乌司他丁干预肝纤维化大鼠实验： 1.血清检测结果：经过不同药物3周的干预，模型鼠+乌司他丁-C组的ALT值是264.15±30.48、模型鼠+生理盐水-B组是374.85±34.21，两组比较P0.05，有统计学差异。模型鼠+乌司他丁-C组的AST值是231.87±19.19、模型鼠+生理盐水-B组是477.45±42.29，两组比较P0.05，有统计学差异。模型鼠+乌司他丁-C组的SOD值是331.64±34.47、模型鼠+生理盐水-B组是312.66±30.45，两组比较P0.05，有统计学差异。模型鼠+乌司他丁-C组的HA值是209.8±17.63、模型鼠+生理盐水-B组是452.17±21.69，两组比较P0.05，有统计学差异。模型鼠+乌司他丁-C组的LN值是151.5±23.43、模型鼠+生理盐水-B组是198.7±23.65，两组比较P0.05，有统计学差异。 2.瞬时弹性超声检测：不同药物干预3周后，模型鼠+乌司他丁-C组大鼠弹性数值变化较大，为1.50±0.19kPa,与干预前相比差异具有统计学意义（P0.05）。模型鼠+生理盐水-B组大鼠弹性数值较干预前未有明显恢复。与干预前的弹性数值差异无统计学意义。 3. HE染色：模型鼠+乌司他丁-C组可见中央静脉区域周围有少量炎性细胞浸润，肝细胞呈气球样变，肝细胞坏死灶并未增多，胶原纤维略有增生，小叶结构破坏，细胞排列无序。模型鼠+生理盐水-B组镜下可见，中央静脉区域周围炎性细胞浸润较模型鼠+乌司他丁-C组严重，肝胶原纤维增，细胞排列杂乱无章。 4.天狼猩红染色：各组天狼猩红染色结果可以看出，模型鼠+乌司他丁-C组的Ⅰ型胶原纤维和Ⅲ型胶原纤维的含量明显低于模型鼠+生理盐水-B组。 5.免疫组化染色：模型鼠+生理盐水-B组大鼠免疫组化染色切片内可见大量广泛分布的棕黄色颗粒，肝组织细胞包浆及周围都有强阳性表达。模型鼠+乌司他丁-C组可见棕黄色染色颗粒散在分布于肝小叶中央静脉及汇管区周围，TGF-β1、caspase-3阳性细胞率明显低于模型鼠+生理盐水-B组大鼠。 结论 TAA诱导大鼠肝纤维化的效果比较可靠。对TAA建立的大鼠肝纤维化模型，使用乌司他丁能够改善其肝纤维化的损伤程度，通过减少胶原纤维的沉积，抑制肝细胞炎症，有效改善纤维化肝脏的血清指标，通过病理、免疫组化、瞬时弹性超声和肝纤维化SSS计分证实了大鼠肝纤维化的减轻。为今后防治肝纤维化提供了新的方法和思路。
【学位授予单位】：广州医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R575.2
【参考文献】
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2698290
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