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左旋-岩藻糖在高脂饮食诱导非酒精性脂肪肝及肠道菌群紊乱中的作用

发布时间:2020-06-07 06:03
【摘要】:背景肠道菌群在维持机体健康的过程中发挥着重要的作用,肠道菌群的紊乱将促进疾病的发生发展。长期的高脂饮食可使机体肠道菌群发生紊乱,诱导机体非酒精性脂肪肝的发生。随着高通量测序技术的迅猛发展,加深了人类对肠道微生物与疾病之间的认识。基于高通量测序结果,以肠道菌群为靶点,探究肠道菌群与非酒精性脂肪肝之间的关系,具有重要的指导意义。目的运用高通量测序及相关生物信息学分析技术,从中筛选出正常饮食小鼠与高脂饮食小鼠肠道菌群的差异性基因,探讨其在高脂饮食小鼠诱导的非酒精性脂肪肝和肠道菌群紊乱中的作用。方法实验一:5周龄的C57BL/6小鼠随机分为2组,分别为正常饮食组(普通饲料饲养)和高脂饮食组(高热量饲料饲养)。18周实验结束,麻醉处死小鼠后,提取这两组小鼠的盲肠肠道菌群的DNA,进行宏基因组测序。实验二:5-6周龄的C57BL/6小鼠随机分为3组,分别为:(1)对照组,给予普通饲料饲养;(2)高脂组,给予高热量饲料饲养;(3)高脂+左旋-岩藻糖组,给予高热量饲料饲养,且从第8周开始,给予该组小鼠左旋-岩藻糖(0.3 g/kg)灌胃处理,一天一次,直至第18周实验结束。同时,对照组和高脂组的小鼠给予等剂量ddH2O灌胃。其中,第15周时,对小鼠进行葡萄糖耐量实验;第16周时,进行胰岛素耐量实验。18周后收集实验动物样本,进行组织学实验;提取小鼠盲肠肠道菌群DNA进行16S核糖体RNA基因测序。结果结果一:宏基因组测序结果显示,高脂饮食改变小鼠肠道菌群的基因组功能。根据设定的筛选条件,发现与正常饮食组相比,高脂饮食组小鼠肠道菌群中的阿尔法-左旋-岩藻糖苷酶(fuca)基因明显降低。fuca基因在两组间的基因丰度差异最显著,该基因在正常饮食组的基因丰度是高脂饮食组的1.33倍,差异具有统计学意义(p=0.0047),因此我们集中关注fuca基因。其中,阿尔法-左旋-岩藻糖苷酶(FUCA)是fuca基因表达的产物,且FUCA是促使左旋-岩藻糖生成的催化酶。结果二:与高脂组小鼠相比,高脂+左旋-岩藻糖组小鼠的体重减轻,附睾脂肪、肠系膜脂肪、皮下脂肪累积均减少,肝脏甘油三酯含量下降,肝脏脂肪样变改善。另外,16S核糖体RNA基因测序结果发现,左旋-岩藻糖使小鼠肠道菌群的内毒素产生菌——脱硫弧菌科减少,在一定程度上恢复了高脂饮食诱导的肠道菌群组成成分和功能成分的紊乱。结论我们的研究提示着左旋-岩藻糖可能是一种治疗高脂饮食诱导的非酒精性脂肪肝和肠道菌群生态紊乱的新策略。
【图文】:

免疫吸附,测定法,健康人,粪便


否发生了变化,应用酶联免疫吸附测定法(ELISA)的试剂盒检测健康人(Con)逡逑以及NAFLD患者粪便中FUCA的含量。结果显示,与Con组相比,NAFLD患逡逑者的FUCA含量呈下降的趋势,但差异无统计学意义(

高脂饮食,肠道菌群,小鼠


Figure邋2-4邋Fuc邋ameliorated邋HFD-induced邋hepatic邋steatosis邋in邋mice逡逑(A)邋Plasma邋levels邋of邋cholesterol邋(CHOL).邋(B)邋Plasma邋levels邋of邋high-density邋lipoprotein邋(HDL).邋(C)逡逑Hepatic邋triglyceride邋(TG)邋level.邋(D)邋Representative邋of邋HE-stained,邋Oil邋Red邋O-stained,邋and邋DHE-逡逑stained邋liver邋sections.邋Scale邋bars=邋100邋pm.邋n=邋7-12.邋Data邋are邋expressed邋as邋mean邋士邋SEM.邋Difference逡逑between邋groups邋were邋assessed邋by邋one-way邋ANOVA.邋*p邋<邋0.05,邋HFD邋group邋vs邋NC邋group;邋#p邋<邋0.05,逡逑HFD邋group邋vs邋HFD邋+邋Fuc邋group.逡逑2.3.5左旋-岩藻糖改善高脂饮食小鼠诱导的肠道菌群组成成分的紊乱逡逑宏基因组测序分析结果显示,与正常饮食组小鼠相比,高脂饮食导致小鼠盲逡逑肠内容物肠道菌群的/MCfl基因丰度降低(图1-1邋C)。紧接着,,为了探宄给予小逡逑鼠Fuc灌胃处理后,是否可以使高脂饮食小鼠的肠道菌群紊乱得到改善;因此,逡逑18周实验结束后,收集NC组、HFD组和HFD邋+邋Fuc组这三组小鼠的盲肠内容逡逑物,提取肠道菌群的DNA,进行16SrRNA基因测序。首先,观察16SrRNA基逡逑32逡逑
【学位授予单位】:南方医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2019
【分类号】:R575.5

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