不同途径移植大鼠BMSCs对大鼠肝硬化治疗作用的研究

发布时间：2020-06-07 16:11

【摘要】： 目的：研究经尾静脉,门静脉,肝脏局部和脾脏局部四种移植途径移植骨髓间充质干细胞后,CCl4所致的肝纤维化的大鼠肝功能变化及肝脏组织变化,探索其治疗作用及其可能机制,寻找最侍移植途径。 方法：一.以密度梯度离心和贴壁法相结合的方法,分离SD大鼠骨髓间充质干细胞,体外培养至第三代,观察其形态变化及生长曲线。 二.250-300克健康雌性SD大鼠60只,以四氯化碳和酒精联合的综合方法诱导肝硬化模型,10周后随机宰杀三只大鼠,观察其肝脏大体形态及组织切片,验证造模成功后,取其中的50只将其随机分为对照组,尾静脉移植组,门静脉移植组,肝脏局部移植组和脾脏局部移植组。 三.DAPI标记对数生长期的BMSCs,孵育过夜后,在荧光显微镜下420nm波长观察其形态和标记率,调整细胞密度为106／ml后备用。 四.严格无菌和良好麻醉条件下,将DAPI标记的BMSCs以106／只的剂量经不同和途径移植给不同的实验组,对照组仅做开腹术。 五.将移植BMSCs后的大鼠继续培养,各组大鼠仍然以0.3ml/100g的维持剂量皮下注射40%CCl4植物油溶液,予正常饮食喂养,以避免肝功能自发性恢复所产生的偏倚。 六.三周后,处死所有实验动物,取其静脉血检测ALT, TBIL,ALB,取肝脏做冰冻切片,荧光显微镜下观察移植率。 结果：一.BMSCs的分离培养和标记。通过密度梯度离心和贴壁法相结合的方法分离得到的BMSCs形态呈棱形,呈纤维细胞样,生长旺盛,原代培养需10天左右,经传代和多次换液后,逐渐去除悬浮细胞和成纤维细胞,形态较均一,传代培养约需3-4天。经DAPI标记的BMSCs在荧光显微镜下呈蓝色,标记率为97%。 二.肝硬化大鼠模型的制做。造模期间大鼠活动减少,精神萎靡,进食减少,但大鼠整体耐受状态良好。造模结束时,大鼠死亡5只,死亡者均为体重较大个体,原因可能是CCl4注射过量。随机处死5只大鼠,显示腹水形成,肝脏表面粗糙。病理切片显示肝内假小叶广泛形成,假叶内可见纤维再分隔现象,同时伴有明显的肝细再生结节。 三.BMSCs移植后效果观察。各实验组肝功能均较对照组有明显改善(P0.05)；肝脏局部移植组较其它实验组肝功能的改善更为明显(P0.05)；门静脉移植组,脾脏注射移植组,尾静脉注射移植各组间肝功能改善无显著差异(P0.05)。 结论：通过密度梯度离心和贴壁培养相结合的方法可获得较高纯度的BMSCs;DAPI是BMSCs一种良好的示踪剂；四氯化碳联合酒精可缩短肝硬化模型的制做时间,提高造模成功率；BMSCs移植后,肝硬化大鼠的肝功能明显改善,且通过肝脏注射途径移植BMSCs治疗肝硬化比经外周静脉,门静脉,脾脏注射更有优势。
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本文编号：2701673